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蓝氏贾第鞭毛虫潜在致病机制初探
蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种常见的人兽共患寄生性原虫,由其导致的贾第虫病已被世界卫生组织列为危害人类健康的10种主要寄生虫病之一.近年来,贾第虫病的危害日益受到重视,然而贾第虫导致腹泻的致病机制尚不明确,可能与其细胞骨架蛋白、虫体分泌物、L精氨酸代谢以及表面抗原变异、免疫学改变等多种因素有关,该文对与贾第虫致病机理相关的研究作一综述.
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蓝氏贾第鞭毛虫特异性细胞骨架蛋白——贾第素研究进展
蓝氏贾第鞭毛虫具有由微管、微丝和骨架蛋白构成的高度发达的细胞骨架系统.近年来,贾第虫的细胞骨架与其致病力的密切关系已经得到证实.在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中,特异性细胞骨架蛋白——贾第素是其中重要的成分之一.对贾第素的研究不仅可为贾第虫细胞骨架的研究增添新的知识和研究资料,还可为贾第虫病的致病机制及抗贾第虫药物靶点的选择提供实验依据.
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蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建
目的 构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体. 方法 采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G:C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423).将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内.提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果. 结果 成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423；RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用. 结论 构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因的mRNA具有高效、特异的切割作用.
