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小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的差异
目的：探讨小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤不同时间点基因表达谱的差异。方法：建立小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤模型，收集再灌注4 h与24 h时缺血侧与对照侧肾脏组织标本，采用基因表达谱芯片技术检测各组标本的基因表达水平，再结合生物信息学技术分析差异表达的基因种类（gene ontology ，GO ）与信号通路，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法验证表达上调、下调与未变化的基因。结果：小鼠肾脏急性缺血再灌注24h差异表达的基因数目多于再灌注4h；再灌注4h时的变化基因主要为代谢与应激相关类型，24 h时的变化基因涉及炎性反应与细胞凋亡等；再灌注4 h和24 h时，缺血再灌注引起的表达上调的基因数目均多于表达下调的基因数目；随机挑选的表达上调、下调与未变化基因可以被实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法验证。结论：缺血再灌注损伤伴随着大量基因表达的改变，缺血再灌注损伤不同时期的差异表达基因与病理生理变化密切相关。
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同步辐射衍射增强成像技术应用于小鼠肾脏的成像实验
目的:不同于常规的吸收成像,相位衬度成像可以获得更高的衬度分辨率、显示更多的微细结构信息,尤其适合于轻元素(含氮、氢成分较高的组织)显示,本实验通过对小鼠肾脏组织的成像研究,旨在评价应用同步辐射相位衬度成像技术在软组织成像诊断上的价值.方法:在北京同步辐射装置形貌站4W1A束线上,设计衍射增强成像实验(DEI)光路,取经过福尔马林固定后的小鼠肾脏组织样品(根据光斑尺寸做适度切除),置于光路的样品架上进行成像,以空间分辨率和组织衬度作为评价标准.结果:在衍射增强(DEI)中腰位成像获得较好的对比度及图像衬度,可以显示包括肾小球结构在内的肾脏微细结构;采用333Si分析晶体要比111Si衬度明显提高.结论:衍射增强成像技术能较好显示肾脏的微细解剖结构,对于以轻元素为主的脏器成像有较好的应用价值,而对于适龄和老龄的肾脏之间存在着的血管模式、形态上的差异在某种程度上有一定的诊断价值.
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应用类同轴技术评价小鼠肾脏的进一步研究
目的:应用同步辐射光源的相干性,进行肾脏组织的类同轴成像研究,在前期研究的基础上进一步评价相位衬度成像技术在肾脏组织成像及研究病变模式方面的意义.方法:在上海光源BL13W1线站,取经过甲醛溶液固定后的小鼠肾脏组织样品,置于类同轴光路的样品架上进行成像,以空间分辨率和组织衬度作为评价标准,比较不同年龄的肾脏的形态、结构差异.结果:在样品与成像板距离Z为150cm获得的肾脏成像,具有较高的组织衬度,年龄在10个月、18个月与年龄24个月小鼠肾脏的形态及血管均存在明显差异.结论:类同轴技术能较好显示肾脏的微细解剖结构,而对于适龄和老龄的肾脏之间存在着的血管模式、形态上的差异对于我们在某种程度上研究肾脏的老化特征有一定的诊断价值.
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应用活体冷冻技术动态观察各种血流动力学改变时血清白蛋白在小鼠近端肾小管的分布变化
目的 应用活体冷冻技术结合免疫组织化学的方法形象化表现各种血流动力学条件下小鼠血清白蛋白经肾小球毛细血管袢滤过后,在近曲小管再吸收的病理生理过程.方法 分别在正常血流、急性高血压和心脏骤停等血流动力学条件下,对模型小鼠的左肾进行活体冷冻及冷冻置换.连续的石蜡切片后,分别进行苏木精一伊红染色和抗小鼠白蛋白抗体免疫组织化学染色.结果 正常血压和心脏骤停情况下,血清白蛋白在血管内清晰定位,少量出现在近端小管顶端的细胞质部分,但在急性高血压情况下,血清白蛋白明显地免疫定位于所有近端小管.结论 活体冷冻技术结合冷冻置换方法可以原位捕获瞬间被活体功能状态的近端肾小管上皮细胞再吸收的血清白蛋白,可视化活体组织细胞的功能形态学特征.
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应用活体冷冻技术分析急性高血压时免疫球蛋白G在小鼠近端肾小管中的分布变化
目的 应用活体冷冻技术结合免疫组织化学方法 形象化地研究急性高血压血流动力学条件下,小鼠免疫球蛋白G(IgG)及其轻、重链经肾小球毛细血管袢滤过后,在近端小管再吸收的病理过程.方法 分别在正常血流、急性高血压和心脏骤停等血流动力学条件下,进行小鼠肾脏活体冷冻及冷冻置换.连续的石蜡切片后,分别进行苏木精-伊红(H-E)染色和IgG、kappa轻链和IgG1重链免疫组织化学染色.结果 正常血压和心脏骤停情况下,IgG在血管内清晰定位,只有极少量出现在近端小管顶端的细胞质内.而在急性高血压情况下,kappa轻链几乎免疫定位于所有近端小管,无IgG1重链表达.并首次展示了小鼠活体内血清IgG的轻链而非重链通过肾小球滤过后,迁移至近端肾小管重吸收的过程.结论 活体冷冻技术结合冷冻置换方法 能够原位瞬间捕获不同血流动力学条件下血清IgG在活体肾组织中的分布状态,可视化活体组织细胞的功能形态学特征.
