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同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中ABCA1、ACAT1表达的影响
目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中三磷酸腺苷-结合转运子A1( ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT1)表达的影响.方法 将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,并分别用50、100、200、500 μmol/L Hcy和100μnol/L Hcy+叶酸+维生素B12( Vit B12)干预72 h,并设对照组(不加入Hcy).采用油红0染色检测泡沫细胞的形成.采用酶终点法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞CE流出的影响.采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ABCA1、ACAT1 mRNA表达；免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白表达.结果 油红O染色显示Hcy加剧了泡沫细胞的形成,但不呈量效关系.实验组(加入50、100、200、500 μmol/L Hcy和100 μmol/L Hcy+叶酸+Vit B12)泡沫细胞阳性百分率均高于对照组(P＜0.05、P＜0.01),以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01).在Hcy的干预下,泡沫细胞胞内TC、FC、CE流出减少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01).100μmol/L Hcy+叶酸+VitB12组与100.μmol/L Hcy组比较,前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多.RTPCR结果显示ABCA1 mRNA表达下调,ACAT1 mRNA表达上调,均以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01)；免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白的表达与其mRNA表达一致.结论 Hcy下调了ABCA1的表达,上调了ACAT1的表达,促使了泡沫细胞形成.
关键词： 同型半胱氨酸 三磷酸腺苷-结合转运子A1 酰基辅酶A 胆固醇酰基转移酶 -
ABCA1、ACAT1DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究
目的 探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用.方法 复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500 μmol·L-1 Hcy和100 μmol·L-1 Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0 μmol·L-1 Hcy).油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量.结果 成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加.结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用.
