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突变体构建文献资料
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转染Ⅱ类分子反式激活因子基因突变体抑制猪SLA的表达
为观察CIITA基因突变体对猪SLA表达的影响,用脂质体转染法将pcDNA3及CIITA突变体pcDNA3mCIITA2、pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4转染人猪血管内皮细胞系PIEC和猪B淋巴细胞系L23.利用流式细胞术/RT-PCR检测各种突变体对猪SLA-DR、-DQ分子/mRNA组成性和诱导性表达的影响.发现两种突变体pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4对PIEC/L23细胞SLA Ⅱ类分子的表达起明显的抑制作用,而空载体pcDNA3和不具有起始密码子的突变体pcDNA3mCIITA2无此作用.提示pcDNA3mCIITA3和pcDNA3mCIITA4能抑制猪SLA Ⅱ类分子的表达.
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汉坦病毒包膜糖蛋白糖基化位点突变体的构建
目的 构建汉坦病毒糖基化位点的突变体.方法 利用基因定点突变的方法构建了5个糖蛋白突变体,即将G1、G2上的天冬酰胺置换为丙氨酸,根据被替换的位置,突变体分别命名为N134A、N235A、N347A、N399A、N928A.结果 构建的5个N-联糖基化位点的突变体,经测序图谱显示原序列中的天冬酰胺(N)均被置换为丙氨酸(A).结论 成功构建了5个糖基化位点的突变体,为进一步研究N-联糖基化的缺失对细胞融合的影响奠定了基础.
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序列分析中巢式定向缺失突变体的构建
为了用DNA序列分析仪快速、大批量地对大片段DNA进行序列分析研究,我们采用巢式定向渐进性截短缺失突变体构建方法,成功地对一株C型逆转录病毒基因的大片段DNA进行了缺失突变体的构建.实验结果显示,该方法效果好,在大片段DNA序列分析研究中具有推广应用价值.文内还对该方法的影响因素进行了讨论.
