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人外周血细胞因子诱导的自然杀伤细胞的体外高效扩增
使用干细胞生长培养基(SCGM)和RPMI 1640培养基,设计不同浓度的抗CD3单抗、IL-2和PHA的培养条件,从健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中高效扩增细胞因子诱导的自然杀伤细胞(CINK),并用MTT法检测其细胞毒活性,优化CINK细胞的体外扩增技术.用优化的方法扩增12例不同类型恶性肿瘤患者CINK细胞.结果显示,在以SCGM为基础培养基时,PBMC经抗CD3单抗、IL-2作用后获得大量增殖,在PHA存在时获得大增殖(P＜0.05),扩增的CINK细胞以CD3-CD56+NK细胞为主,扩增细胞的细胞毒活性显著高于相同来源的CIK细胞和CD3AK细胞,为应用CINK细胞进行自体肿瘤过继免疫治疗奠定了基础.
关键词： 细胞因子诱导的自然杀伤细胞 体外扩增 肿瘤 -
细胞因子诱导的自然杀伤细胞培养体系的评价
目的:评价采用γ-干扰素(IFN-7)、白介素-2(IL-2)、抗 CD3 单抗 3 因子对外周血来源的 CIK 细胞培养的效果.方珐:采集17例实体肿瘤患者的外周血,分离单个核细胞培养,于培养第 1 天加入重组人IFN-Y,第2天加入抗人 CD3 单抗、重组人IL-2,隔天半量换培养液并添加人重组IL-2以维持其浓度,培养21 d收获细胞.于培养第1、7、14、21天进行细胞计数,同时于培养第1、8、14、21天测定细胞免疫表型.结果:细胞因子共刺激2～3d即出现细胞集落,14 d后CIK细胞总数达(6～17)×109/L,较培养前扩增47～150倍,细胞存活率大于95;具有免疫表型CD3+、CD4+、CD8+和CD3+CD56+细胞的平均值分别从培养前的(65.1±1.9)、(36.9±0.8)、(28.5±3.1)、(1.8±0.4)增加到培养第21 天的(89.6±2.1)、(50.1±1.9)、(57.2±2.5)、(36.1± 4.2).结论:按照上述方法培养的CIK 细胞在体外扩增率高,方法可行,CIK 细胞在体外培养到14～21 d,CD3+CD56+呈现高表达,此时期适宜应用于临床治疗,且患者自体外周血易获得、整个培养过程简便,值得临床应用推广.
关键词： 细胞因子诱导的自然杀伤细胞 细胞培养 γ-干扰素 白介素-2 抗CD3单抗
