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B104CM对早期培养时大鼠O2A祖细胞迁移的促进作用
目的:研究B104CM对体外培养条件下的少突胶质前体细胞的促迁移作用.方法:取新生SD大鼠大脑皮质原代混合培养少突胶质前体细胞,B104神经胶质瘤细胞株条件培养液增殖并纯化,琼脂糖滴迁移实验观察B104CM对少突胶质前体细胞迁移的影响.结果:B104CM实验组可以促进少突胶质前体细胞的迁出,迁移速度有时段上的差别.结论:B104CM对体外培养的少突胶质前体细胞有增殖作用的同时,还可促进其迁移.
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构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化
目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型.方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化法分四组培养,分别为细胞因子增殖联合摇床震荡分离纯化法组,B104CM增殖联合摇床震荡分离纯化法组,细胞因子增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组,B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组.倒置显微镜下观察神经细胞形态学变化并进行细胞计数.A2B5和髓鞘碱性蛋白鉴定少突胶质细胞并分析其纯度.纯化后的少突胶质细胞祖细胞分化培养3d后分四组培养,正常组正常培养,低氧组分三组,换无糖DMEM培养基,OGD 1、2、3h.然后采用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞的凋亡率.结果:(1) B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法较其他3种培养方法收获的少突胶质细胞祖细胞数量多(P＜0.05).(2) A2B5和MBP特异性标记,细胞纯度可达到95％.(3) MTT结果显示:OGD 1 h少突胶质细胞的细胞活力即降低(P＜0.05),随着缺氧时间延长细胞活力呈降低的趋势更加明显(P＜0.05).(4)流式细胞测细胞凋亡的结果显示:OGD 1 h、2h、3h,细胞的凋亡率分别为14.43％±0.20％,21.99％±0.42％和44.71％ ±0.20％,均高于正常对照组(6.86％±0.05％,P＜0.05).结论:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化培养法与其他三种方法比较实验操作简单,收获的少突胶质细胞祖细胞数量多,可用于少突胶质细胞的培养.(2) OGD可致少突胶质细胞损伤,且与OGD持续时间密切相关,实验成功的建立OGD损伤模型.
