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  • 蛋白激酶 C激活的荧光共振能量转移研究

    作者:周建庆;张玉忠

    目的:目前,临床上对于蛋白激酶C( PKC)激活的检测方法还缺乏一定的机制,检测过程中灵敏性或直接性不强,利用荧光共振能量转移技术能够有效的检测PKC激活。方法将检测的PKC激活报告分子单独转染或与甲状旁腺素1型受体( PTHR1)的质粒共转染,将这些细胞培养72 h后,利用激光共聚焦显微镜来检测它们的FRET的变化效果,从而用来辅助判断甲状旁腺素蛋白激酶C是否被激活。结果对于只转染CKAR质粒的HEK293细胞中,甲状旁腺素能够有效的降低CKAR分子的FRET效率,增加青色荧光与黄色荧光的比值,而在检测过程中PTH不能使C/Y值发生改变;而在共转染CKAR质粒的HEK293细胞中,PTH则能够有效的增加C/Y的值。结论 PKC激活报告分子能够用来检测PKC是否被激活,这种方法的检测能够为PKC有关信号的转导、实验等提供有效的平台。

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