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STAT3/iNOS信号对喉癌Hep-2细胞的增殖作用
目的 观察信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)信号通路对喉癌Hep-2细胞(Hep-2)的增殖作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养Hep-2细胞,STAT3慢病毒(2μL,1×1010病毒颗粒)和同剂量siRNA STAT3转染Hep-2细胞6d后,细胞分为对照组、siRNA STAT3组和STAT3组.MTT法检测各组Hep-2细胞增殖情况.实时荧光定量PCR检测检测各组细胞STAT3、iNOS及血管内皮因子C(VEGF-C) mRNA相对表达.结果 镜下观察STAT3组Hep-2细胞数量显著高于对照组和siRNA STAT3组,MTT法显示STAT3组Hep-2细胞在6d增殖显著高于对照组和siRNA STAT3组(P＜0.05),实时荧光定量PCR结果表明STAT3转染组STAT3、iNOS和VEGF-C mRNA表达显著高于对照组和siRNA STAT3组(P＜0.05),而对照组和siRNA STAT3组STAT3、iNOS和VEGF-C蛋白表达未见显著差异(P＞0.05).STAT3与iNOS及VEGF-C mRNA表达显著正相关(P＜0.05).结论 STAT3/iNOS信号通路能够通过上调VEGF-C表达促进喉癌Hep-2细胞增殖,STAT3/iNOS信号通路可成为治疗喉癌新的靶点.
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牛蒡子苷元对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制作用及其机制探究
本实验研究不同浓度牛蒡子苷元(Arctigenin,ARG)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,从而为进一步阐明ARG的抗癌机制及临床应用提供实验依据.1 材料和方法1.1 主要材料和试剂:ARG购自美国Sigma公司;MTT试剂盒购自Chemicon;Caspase-3及Caspase-9活性检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所;引物为invitrogen公司合成;RNA抽提试剂购自Trizol reagent;cDNA第一链合成试剂盒、RealMasterMix(SYBR Green)荧光定量PCR试剂盒购自Tiangen公司;兔抗人GAPDH、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2单克隆一抗购自cell Signaling公司.
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酪氨酸激酶抑制剂AG825对喉癌细胞的影响
目的:通过体外实验检测酪氨酸酶抑制剂AG825对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:通过MTT法观察酪氨酸酶抑制剂AG825在不同浓度及时间时对Hep-2细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测其早期凋亡率;Western blot技术检测细胞内信号传导分子的表达水平的变化.结果:不同浓度的AG825对Hep-2细胞增殖均具有抑制作用,并且随着药物浓度的增大及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强.流式细胞学检测显示:AG825促进了Hep-2细胞的早期凋亡,并具有剂量依赖性.Western blot结果显示:AG825作用以后,表皮生长因子下游的信号传导蛋白因子p-Akt和p-MAPK表达水平明显降低,并且随着药物浓度的增大,下游的信号传导因子的表达水平依次下降.结论:酪氨酸激酶抑制剂AG825能有效的抑制Hep-2细胞的生长,并促进细胞的早期凋亡.
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血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子在喉癌细胞Hep-2中的表达
目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在喉癌细胞Hep-2中的表达,及其与喉癌细胞生长、浸润及转移的关系.方法培养Hep-2和正常永生化表皮细胞HaCaT,提取总细胞RNA,应用逆转录聚合酶链反应检测VEGF mRNA和bFGF mRNA在Hep-2和HaCaT细胞中的表达.结果VEGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.839±0.063);VEGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.305±0.066),差异有极显著性意义(t=14.94,P＜0.01).bFGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.792±0.058);bFGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.296±0.049),差异有极显著性意义(t=17.54,P＜0.01).结论VEGF及bFGF与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系.
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柯里拉京对人喉癌Hep-2细胞生长的研究
目的:研究柯里拉京(Corilagih)对人喉癌细胞Hep-2的抑制生长作用及凋亡诱导作用.方法:四亚基噻唑蓝(MTT)法测定柯里拉京对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡；免疫印记法(Western-blot)测定Bax 及bcl-2表达,荧光定量PCR法测量人喉癌Hep-2细胞增殖诱导配体(aproliferation-inducing ligand,APRIL)的表达量.结果:2.5～20μg/ml的柯里拉京均能押制人喉癌细胞Hep-2生长,并有明显的时间和剂量依赖性,2.0μg/ml的柯里拉京作用72h后对人喉癌细胞Hep-2生长抑制作用达到73％；流式细胞仪检测不同浓度柯里拉京作用72h后的细胞凋亡率分别为13.80％±2.32％,21.72％±1.51％,37.43％±1.06％和54.91％ ±2.40％；经柯里拉京作用后,免疫印记法显示柯里拉京上调Bax,同时降低bcl-2表达,使Bax/bcl-2比值增加；柯里拉京作用人喉癌Hep-2细胞后其增殖诱导配体的mRNA表达量随时间的延长和浓度的增加而升高,48 h后备浓度与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:柯里拉京在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡.
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发酵蜈蚣粉醇提物的体外抗肿瘤有效部位筛选
目的 筛选发酵蜈蚣粉醇提物的抑制肺腺癌A549细胞株增殖的有效部位并研究其石油醚部位的抗肿瘤活性.方法 取发酵蜈蚣粉,用80％乙醇回流提取,提取液分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别用体外MTT法检测各萃取部位对肺腺癌A549细胞增殖的抑制效果;考察对A549增殖抑制效果较好的石油醚部位对喉癌Hep-2、肝癌Bel-7402及乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤活性.结果与结论 发酵蜈蚣粉醇提物的的石油醚部位及乙酸乙酯部位为抑制肺腺癌A549细胞增殖的有效部位,石油醚部位对喉癌Hep-2、肝癌Bel-7402及乳腺癌MCF-7细胞的增殖均具有较强的抑制效果.
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SDF-1/CXCR4信号通路对喉癌Hep-2细胞增殖的作用
目的:观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对喉癌Hep-2细胞的增殖作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养Hep-2细胞,SDF-1慢病毒(4μl,1×1010病毒颗粒)和同剂量siRNA SDF-1转染Hep-2细胞6d后,细胞分为对照组、siRNA SDF-1组和SDF-1组.MTT法检测各组Hep-2细胞增殖情况.实时荧光定量PC检测各组细胞SDF-1、CXCR4及血管内皮因子C(VEGF-C)mRNA相对表达.结果:镜下观察SDF-1组Hep-2细胞数量显著高于对照组和siRNA SDF-1组,MTT法显示SDF-1组Hep-2细胞在8d增殖显著高于对照组和siRNA SDF-1组(P＜0.05),实时荧光定量PCR结果表明SDF-1转染组SDF-1、CXCR4和VEGF-C mRNA表达显著高于对照组和siRNA SDF-1组(P＜0.05),而对照组和siRNA SDF-1组SDF-1、CXCR4和VEGF-C mRNA表达未见显著差异(P＞0.05).SDF1与CXCR4及VEGF-C mRNA表达显著正相关(P＜0.05).结论:SDF-1/CXCR4信号通路能够通过上调VEGF-C表达促进喉癌Hep-2细胞增殖,SDF-1/CXCR4信号通路可成为治疗喉癌新的靶点.
关键词： 喉癌Hep-2细胞 基质细胞衍生因子-1 趋化因子受体4 增殖
