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Dispase与RPE细胞联合诱导的小鼠PVR模型的建立
目的 用dispase和同种异体视网膜色素上皮(retina pigment epithelium,RPE)细胞联合作用,诱导C57BL/6J小鼠增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的产生,并评价该模型的有效性.方法 将32只健康的成年C57BL/6J小鼠随机平均分成4组.分别向右眼玻璃体腔内注射5μL dispase+RPE(A组)、dispase(B组)、RPE(C组)、PBS(D组).A、B两组dispase的浓度为2.4 U/mL.A、C两组RPE细胞的浓度为2×104/5 μL.于注射后3天、1、2、4、6周时,利用裂隙灯显微镜检查眼前节情况,用直接检眼镜检查眼底、记录PVR的分级.结果 注射后第3天～6周,A组、B组、C组均不同程度地发生了玻璃体积血,玻璃体内可见弥散色素颗粒、小细胞团,条索及膜结构形成,视网膜皱褶,视网膜脱离等PVR典型征象.A组较B、C两组病变发生时相早、程度深而广泛.D组未见明显的PVR征象发生.注射后第6周结束时,A、B、C3组视网膜脱离率分别为87.5％、62.5％和75％.结论 Dispase和RPE细胞诱发的小鼠PVR模型,建立方法快速,有效,成功率高,可广泛应用于对PVR病理过程,药物筛选,基因治疗等方面的研究.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜脱离 dispase 视网膜色素上皮细胞 -
四种气管上皮细胞分离培养方法的比较研究
目的:比较四种不同的方法在培养气管上皮细胞中的异同,改进其培养技术,为组织工程气管提供种子细胞. 方法: 用两步酶消化法(使用0.1% Dispase4℃消化18h后,用0.25%的胰酶37℃消化5min)、Dispase冷消化法(用0.1%Dispase4℃消化18h)、胰酶温消化法 (0.25%的胰酶37℃消化10min)和机械刮刷法四种方法分离、培养兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量和纯度. 结果: 两步酶消化法、Dispase冷消化法较其他两种方法得到的气管上皮细胞纯度高,细胞状态好;Dispase冷消化法得到细胞数量较其他方法少,其余三种方法得到的细胞数统计学上不存在差异. 结论: 两步酶消化法较其他方法所得细胞数量多、纯度高、细胞成活率高,是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法.
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兔眼玻璃体切割术中应用dispase的毒性研究
目的 兔眼中央玻璃体切割后注射dispase蛋白酶,观察dispase蛋白酶诱导玻璃体后脱离(PVD)形成的安全浓度.方法 新西兰白兔24只,随机分为A、B、C组,每组8只,以右眼为实验眼,左眼为对照眼.兔眼中央玻璃体切割后注射0.5mL dispase,浓度分别为A组0.05μmol/min、B组0.1μmol/min、C组0.2μmol/min;对照组注射0.5mL无菌PBS.用药3个月后光镜和透射电镜观察dispase 蛋白酶对视网膜超微结构的影响.结果 光镜下可见0.05μmol/min组、0.1μmol/min组、对照组眼视网膜结构完整,排列整齐,未发现异常改变.0.2μmol/min组眼神经节细胞减少.透射电镜下见各实验组动物视网膜内界膜清晰完整,但A组用药3个月后视网膜光感受器内外节结构大致正常,B组、C组实验眼视网膜在用药3个月后有不同程度的光感受器内外节结构紊乱;节细胞水肿,线粒体嵴断裂、空泡变.对照组视网膜超微结构未见明显异常.结论 0.05、0.1、0.2μmol/min的dispase均可以诱导兔眼的玻璃体后脱离,随着浓度的增加,毒性增大.
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Dispase诱导玻璃体后脱离的实验研究
目的探讨dispase兔眼玻璃体腔内注射诱导玻璃体后脱离(PVD)的效能及对眼内组织的毒性作用.方法36只兔按观察时间和注入dispase浓度不同分为Ⅰ组(10 μmol/(min·mL)、5 μmol/(min·mL)、1 μmol/(min·mL))和Ⅱ组(0.25 μmol/(min·mL)、0.1 μmol/(min·mL)、0.05 μmol/(min·mL)).对照眼注入磷酸盐缓冲液(PBS).Ⅰ组注药30 min、Ⅱ组1周内进行PVD和眼内毒性的观察.结果(1)有PVD者Ⅰ组各小组均占4/5;Ⅱ组中0.25 μmol/(min·mL)和0.1 μmol/(min·mL)组各占5/5,0.05 μmol/(min·mL)组占4/5;对照眼均无PVD.两组中实验眼的PVD诱导率与对照眼比较,差异均有显著性(P＜0.05).(2)两组中较高浓度者可见前房炎性反应、玻璃体混浊或视网膜损害等.在5 μmo·l/(minmL)暴露30 min组和0.25 μmol/(min·mL)组电镜下可见视网膜内界膜裸露、感光细胞外段结构紊乱和内段空泡形成.结论1 μmol/(min·mL)(30 min)或0.05 μmol/(min·mL)(1周)两种应用方式是有效和安全的.
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Dispase诱发兔眼玻璃体后脱离的效果和安全性评价
目的采用Dispase在兔眼中诱导完全性PVD形成,评价其效果和安全性.方法选择健康成年的青紫蓝兔30只,随机分成5组,采用玻璃体内注射,分别注射Dispase 0.005 U、 0.012 5 U(2组)、0.025 U、 0.05 U/0.05 ml,PBS 0.05 ml注射到另一只眼内作为对照.术前术后眼底镜、裂隙灯和VOLK+90 D随访观察,并进行B超和视网膜电图(ERG)检查,后取眼球对视网膜进行扫描电镜和透射电镜观察.结果注射Dispase≥0.012 5 U可见玻璃体后脱离,部分伴有不同程度的眼底出血;B型超声检查见玻璃体混浊和后脱离;术后电生理检查,0.005 U和0.012 5 U组ERG没有变化,≥0.025 U,部分出现ERG振幅下降;对照组没有以上改变.结论Dispase 0.012 5 U可以在兔眼中成功、安全诱发完全性玻璃体后脱离(PVD),更大剂量同样有效,但是有一定毒性作用.
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Dispase在成年鼠骨骼肌干细胞纯化中的价值
目的:寻找一种佳的骨骼肌干细胞分离及纯化方法.方法: 采用成年雌性SD大鼠,分别采用二步消化法和Dispase消化法分离肌干细胞,然后用差速贴壁技术纯化肌干细胞,骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果: Dipase组肌干细胞的数量明显多于二步消化法组,且细胞的生长速度也明显较后者快,而衰老速度则明显慢于后者. 结论: Dipase可明显减轻细胞的损伤,提高肌干细胞的数量和质量,是一种佳的细胞分离酶.
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维生素K3、Dispase联合防治兔增生性玻璃体视网膜病变的实验研究
目的 研究Dispase和维生素K3分别单独和联合用药对实验性兔增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR) 的防治作用与毒性.方法 40只兔眼,分为对照组、Dispase组、维生素K3组和联合用药组(每组10只眼).采用眼球穿通伤及玻璃体内注入富含血小板血浆的方法制备外伤性PVR模型后,经睫状体玻璃体腔注入药物,观察比较Dispase、维生素K3及两者联合应用对实验性兔增生性玻璃体视网膜病变的影响.结果 用药组平均增生级别均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);联合用药组平均增生级别低于单独用药组,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);其中,视网膜前的平均增生总细胞数及平均增生成纤维细胞数,维生素K3组和联合用药组少于对照组及Dispase组,比较差异有统计学意义(P＜0.05);但前两组比较无差异,后两组亦无差异.视网膜前的平均增生色素上皮细胞数及平均增生神经胶质细胞数,对照组与各用药组两两比较,差异无统计学意义(P＞0.05).电镜结果显示各用药组视网膜超微结构无明显异常.结论 维生素K3与Dispase可在一定程度上抑制外伤性PVR的发生、发展,且两者有一定协同作用,对视网膜无毒性损害.
关键词： 维生素K3 dispase 增生性玻璃体视网膜病变 外伤性 动物实验
