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ABCE1在肺腺癌组织细胞中的表达及临床意义
目的 研究ATP结合,盒转运子E1(ABCE1)在肺腺癌组织细胞中的表达,并探讨其临床意义.方法 用RT-PCR及Western Blot方法检测18例肺腺癌7例正常肺组织及5例转移淋巴结组织标本中ABCE1的mRNA和蛋白的表达.结果 三种组织中均存在ABCE1的表达;肺腺癌组织ABCE1蛋白及mRNA的表达量高于正常肺组织(P＜0.05,P＜0.05);转移淋巴结组织中ABCE1蛋白及mRNA的表达量高于肺腺癌组织(P＜0.05,P＜0.05);18例肺腺癌中ABCE1蛋白及mRNA的表达量在Ⅲ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05,P＜0.05);N1组高于N0组(P＜0.05,P＜0.05).结论 ABCE1基因可能参与了肺腺癌的形成和演变,其表达水平在一定程度上可以反映肺腺癌的转归,有望成为新的肿瘤分子标志物,用于肿瘤的早期诊断、病情检测和预后评估.
关键词： ATP结合盒转运子E1 肺腺癌 RT PCR Western blot -
重组Nox1在NIH3T3细胞中的表达及其对活性氧的影响
目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响.方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3 Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和细胞活力.结果RT PCR显示转染后的NIH3T3细胞可以有效地转录Nox1 mRNA,细胞中的活性氧水平明显升高,同时对As2O3细胞毒作用更加敏感.结论含有Nox1 cDNA的重组质粒pcDNA3 Nox1转染细胞后可有效表达Nox1,使活性氧水平升高,并因此增加细胞对药物细胞毒的敏感性.
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银屑病皮损 VDR表达水平的研究
为了解维生素 D受体 (VDR)在银屑病皮损中的表达情况 , 采用 RT PCR方法检测了 10例寻常型银屑病患者皮损 VDR mRNA表达水平 , 并与正常人皮肤做对照 . 结果显示 : 寻常型银屑病患者皮损 VDR mRNA水平明显低于正常人皮肤 (P<0.05). 寻常型银屑病皮损 VDR mRNA水平下降 , 可能与银屑病的发病有一定的关系 .
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食管鳞癌FHIT基因等位缺失及其表达下调
背景与目的:食管癌 3号染色体短臂( 3p14)经常发生缺失或易位,脆性组氨酸三联体基因 (fragile histidine triad, FHIT)定位于 3p14.2,在许多肿瘤中均发现此基因缺失或表达异常.然而, FHIT基因在食管癌中变化的形式以及 FHIT改变在食管癌发生、发展中的作用尚未明确.本研究旨在探讨 FHIT基因在食管鳞癌中的变化情况及其意义.方法:用微卫星分析方法观察 80例食管鳞癌中 FHIT基因的缺失,并用半定量逆转录聚合酶链反应法( reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT PCR)分析其中 20例食管鳞癌 FHIT mRNA表达的变化.结果: FHIT基因内标志 D3S3356、 D3S3378、 D3S3361在本系列的标本中为纯合子. FHIT基因旁侧微卫星位点 D3S1234和 D3S1540在癌旁组织具有较高的杂合度,信息个体中肿瘤组织的杂合性丢失( loss of heterozygosity, LOH)频率分别为 57.69%( 30/52)和 67.86%( 38/56).在 20例同时获得其 RNA的标本中, 15( 75%)例出现 FHIT基因的 mRNA表达下调,且多发生于 DNA水平伴有 LOH的病例.但 LOH发生与 mRNA表达下调并不完全一致.结论:食管癌中 FHIT基因频发异常, LOH是 FHIT基因表达失调的主要机制,表观遗传学( epigenetic)变化可能与部分食管癌中 FHIT基因的表达下调相关.
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RT-PCR检测CEA分泌性肿瘤患者血中的CEAmRNA
目的:建立一种外周血循环中肿瘤微转移检测的方法.方法:20例CEA分泌性肿瘤患者及8例健康对照,用逆转录PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,简称为RT-PCR)方法检测血中的CEAmRNA,同时用放免法检测血清CEA水平.结果:20例患者CEAmRNA阳性率为55%,而健康对照均为阴性.外周血CEAmRNA的存在与CEA分泌性肿瘤远处转移密切相关,而与CEA水平无明显关系.结论:RT-PCR是肿瘤微循环检测的灵敏方法,血中CEAmRNA阳性提示肿瘤的早期转移.
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一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析
背景与目的:肺癌细胞的多药耐药(multi drugresistance,MDR)是药物治疗失败的重要原因,但其机制尚未完全清楚.我们已经通过SSH发现了1条新的耐药相关基因片段,经检索GenBank,发现其与2001年4月公布的一条新的基因序列BC006151同源性高达99%.本研究旨在克隆该基因的全长,并检验该基因在几种肺癌细胞株中的表达,为进一步研究其功能和调控奠定基础.方法:根据BC006151基因序列设计引物,通过RT PCR证实肺腺癌MDR细胞SPC A 1/cDDP确实包含BC006151基因后,扩增该基因全长cDNA,通过测序对所得序列进行分析,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行预测.应用半定量RT PCR方法检验小细胞肺癌SH77、大细胞肺癌H460、肺腺癌SPC A 1和SPC A 1/cDDP等细胞株中该基因mRNA的表达.结果:成功克隆了BC006151基因的全长cDNA片段,长1298bp,它具有完整的阅读框和编码区,并与经SSH获得的片段有极高的同源性.该基因在MDR细胞株SPC A 1/cDDP的表达明显高于其亲代细胞株;SPC A 1表达高于H460,SH77未见表达.结论:BC006151基因是与cDDP致肺腺癌MDR密切相关的一条新基因.该基因全长cDNA片段的克隆将有助于阐明其在肺癌MDR发生中的作用.
