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苦地湿敷剂对小鼠深Ⅱ度烧伤创面MK2表达的影响
目的 研究苦地湿敷剂(Kudi Shifu Ji,KDSFJ)对小鼠皮肤深Ⅱ度烧伤修复中MAPK激活蛋白激酶2(MAP kinase-activated protein kinase 2,MAPKAP-K2 or MK2)表达的影响.方法采用80 ℃恒温水烫小鼠皮肤3 s制作60只深Ⅱ度烧伤小鼠模型,造模成功后随机将其分成3组:苦地湿敷剂组(A组),硼酸组(B组),空白组(C组),其中A和B组外喷伤口,每天治疗2次,C组不做处理.在建模后第4、8、12天,每组分别随机处死5只小鼠,第19天时终止研究,处死所有小鼠,每次测量创面或疤痕面积,并进行免疫组化染色,应用图像分析软件Image-Pro plus 6.0进行半定量分析,检测MK2的表达情况.结果 ①第4天,A组面积明显小于其他两组(F=28.655,P＝0.000);第12天,A组小鼠全部已脱痂愈合,皮损小(F=2.910,P＝0.072);第19天,A组疤痕面积小(F=7.447,P=0.008).②不同时间3组间MK2表达平均光密度比较差异均有统计学意义.C组在实验第4～19天全程呈高表达,B组在实验第4～12天MK2表达明显低于其他组,在第19天上升接近C组水平.A组MK2的表达呈现出先逐渐抑制,第12天时达到低点,第19天稍微回升,但明显低于其他组(F=25.687,P=0.000).结论 ①MK2在小鼠深Ⅱ度烧伤创面发生和愈合过程中呈持续高表达;提示创面组织MK2通路参与炎症的发生、发展和修复;②苦地湿敷剂促进烧伤创面的愈合,其机制可能与逐渐抑制创面MK2表达,进而降低炎症过度反应有关.
关键词： 苦地湿敷剂 深Ⅱ度烧伤 MAPK激活蛋白激酶2 免疫组织化学 -
MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究
目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况. 方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况.结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布.在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变.结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响.
关键词： 蛋白激酶类 突变 基因表达 细胞内定位 p38丝裂原活化蛋白激酶 MAPK激活蛋白激酶2
