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检测STAT2基因多态性的PCR-PIRA方法的建立
目的:为了检测信号转导和转录活化蛋白2 (signal transducer and activator of transcription factor2,STAT2)基因的rs12422499和rs2066807两个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),建立一种简单、可靠的多聚酶链式反应-引物介导的限制性分析法(polymerase chain reaction-primer introduced restriction analysis,PCR-PIRA).方法:微量盐析法提取外周静脉全血DNA,设计引物扩增STAT2基因的rS2066807及rs12422499位点所在的基因片段,采用限制性内切酶PsyI及BseDI分别酶切相应PCR产物,凝胶电泳方法观察酶切结果.同时将PCR产物进行DNA测序.结果:PCR扩增rs2066807基因片段,长度为469bp,经PsyI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs2066807的C/C(469 bp)、G/G(262 bp、207 bp)、C/G(469bp、262bp及207bp)三种基因型；PCR扩增rs12422499基因片段,长度为189bp,经BseDI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs12422499的C/C(189 bp)、G/G(134 bp、55 bp)、C/G(189 bp、134 bp及55 bp)三种基因型.将PCR产物直接进行DNA测序,SNP测序结果与PCR-PIRA方法获得的结果一致.结论:成功建立了一种检测STAT2基因SNPs的PCR-PIRA法,该方法只需简单的PCR扩增和酶切消化,因此操作简单、方便；通过与直接测序结果比较,显示该方法可信.PCR-RIPA方法不仅为检测STAT2基因多态性提供了实验手段,也为检测其他基因点突变提供了实验方法.
