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毛细管内均相辣根过氧化物酶(HRP)与核酸杂交偶联HRP催化化学发光比较研究
目的:了解毛细管内核酸偶联和游离辣根过氧化物酶(HRP)催化化学发光差异.方法:不同浓度HRP和经核酸杂交固定于毛细管内壁HRP催化化学发光反应.结果:①游离HRP催化化学发光线性检测范围窄(2.7×10<'-5>-1.3×10<'-6>mg/ml,R<'2>>0.96),下限为1.0×10<'-7>mg/ml;②2.0×10<'14>-2.0×10<'6>copies/ml的5μl单链DNA杂交后,1.0-10min时DNA浓度M对数(1g<'M>)与化学发光I值线性相关(R<'2>>0.99),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d);③5.0×10<'11>-5.0×10<'6>copies/ml的5μl PCR产物杂交后,10min内PCR产物对数1g<'M>与I值线性相关(R<'2>>0.97),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d).4.0-7.0min内1g<'M>与I值的R<'2>>0.99,3次平行检测标准偏差<5.0%.结论:毛细管内核酸杂交的HRP催化化学发光检测线性范围宽、灵敏度高、底物用量少,有望用于临床核酸分子杂交检测.
