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hbFGF文献资料
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应用计算机软件辅助重组hbFGF基因的筛选
目的:尝试通过计算机的辅助筛选基因重组组合,期望能减少人工筛选的工作量并得到高表达的蛋白.方法:从影响表达的两个因素即翻译起始区TIR的二级结构自由能和翻译起始区的密码子偏好性问题研究入手,对部分核苷酸进行了突变,利用RNA二级结构预测软件DNASISv2.5对hbFGF的TIR区起始密码子开始前35个核苷酸进行了分析,筛选出预期表达量高的组合并在实验中加以验证.结果:从32种突变方式中筛选出10条自由能绝对值低的序列做引物,克隆至表达载体上,得到了两株高表达菌株.结论:利用计算机辅助设计可以优化和筛选实验结果,提高工作效率,降低具体实验的工作量.
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m-hbFGF在角膜损伤修复中的作用
目的:探讨m-hbFGF在促进角膜损伤修复中的作用.方法:通过角膜穿通伤模型,检测用药后角膜伤口承受压力的极限值.结果:m-hbFGF组110.33±8.43和hbFGF组114.67±9.03均大于对照组75.33±13.66(P＜0.05),hbFGF组与m-hbFGF组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:m-hbFGF有明确的促进角膜穿通伤伤口愈合的作用.在促进角膜穿通伤伤口愈合的作用方面,m-hbFGF和hbFGF无明显差异.
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大肠杆菌分泌型载体表达重组人碱性成纤维细胞生长因子
设计构建了带有大肠杆菌外膜蛋白(OmpA)信号肽序列的重组分泌型表达载体pSE-hbFGF,在大肠杆菌DH5α中分泌表达了重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF).SDS-PAGE、免疫印迹及生物活性测定均表明表达产物分泌到细菌细胞周质和培养基中.分泌到周质中的rhbFGF可占周质总蛋白的15%.
