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ORP4L文献资料
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ORP4L多克隆抗体的制备及其在蛋白质组学研究中的应用
目的:原核表达并纯化人氧化固醇结合蛋白相关蛋白4(ORP4L)肽段,制备兔抗人ORP4L多克隆抗体,并利用其进行蛋白质组学研究.方法:应用PCR技术扩增人ORP4L 382-485氨基酸(ORP4Lm)的基因序列并插入到PGEX-4T-1载体中,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)中表达融合蛋白GST-ORP4Lm.利用所表达的融合蛋白中含有的GST标签进行亲和纯化.用所获得的纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人ORP4L多克隆抗体.用Western blotting检测抗体免疫特异性.将亲和纯化后的抗体偶联到CNBr-actived sepharose beads上,利用免疫沉淀的方法,通过质谱仪分析鉴定可能与ORP4L存在相互作用的蛋白质.通过Western blotting进一步确证特异性的相互作用蛋白.结果:在大肠杆菌中表达并纯化了GST-ORP4Lm重组蛋白,用其免疫新西兰大兔,成功制备了相应兔源多克隆抗体,Western blotting证实该抗体可以特异识别内源性及外源性的ORP4L蛋白.质谱分析和Western blotting的结果表明所制备的多克隆抗体可以用于蛋白质组学研究.结论:利用重组的GST-ORP4Lm融合蛋白成功制备了有良好特异性的ORP4L多克隆抗体,并可将其用于ORP4L的蛋白组学研究.
