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蛋白表达定位文献资料
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过氧化物酶蛋白1真核表达载体构建及在Hela细胞的表达与定位
目的:构建过氧化物酶蛋白1 (PRDX1)的真核表达载体,观察其在He1a细胞内表达及定位.方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增得到小鼠PRDX 1编码序列,酶切后克隆至pcDNA3-myc载体.重组质粒通过PCR、酶切、测序证明构建正确后经脂质体转染He1a细胞,然后利用Western blot和荧光显微镜技术观察该融合蛋白在细胞内表达及定位.结果:经鉴定证明重组质粒构建正确；Western blot实验显示,该质粒能够在He1a细胞中特异表达；免疫荧光试验显示,蛋白产物分布在胞浆和胞核,证明该蛋白在细胞内高表达.结论:成功构建带有myc标签的PRDX 1真核表达载体,该质粒能够在哺乳细胞中特异表达并且外源性PRDX1蛋白分布在Hela细胞胞浆胞核内,为深入研究PRDX1蛋白在细胞内相关生物学研究奠定了基础.
