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CTCF是一种细胞类型特异性表达的核内定位蛋白因子
目的 探讨CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)在细胞核内的定位以及该基因表达水平的细胞类型特异性.方法 通过蛋白质印迹技术对乳腺癌细胞MCF-7的不同细胞组分中CTCF蛋白的含量进行了分析；应用蛋白质免疫荧光技术,通过共聚焦显微镜分析系统对CTCF在MCF-7单细胞中的定位进行了分析；然后通过蛋白质印迹技术和RT- qPCR技术分别对CTCF在正常外周血白细胞、MCF-7以及淋巴瘤细胞Jurkat和Ramos等不同类型细胞中的表达水平进行了分析.结果 蛋白质印迹和蛋白质免疫荧光技术的分析结果表明CTCF主要分布在细胞核内.蛋白质印迹和RT-qPCR技术的分析结果表明CTCF在这些不同细胞类型中的表达水平各不相同,与正常细胞相比较,CTCF在肿瘤细胞中的表达水平明显增高；在不同类型的肿瘤细胞中的表达水平也存在着很大的差异性.结论 CTCF是一种细胞核内特异定位的蛋白因子,CTCF的表达水平具有细胞类型特异性.
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胎盘长链非编码RNA CTD-2012K14.6异常表达致胎儿巨大的初步功能研究
目的 探讨长链非编码 RNA ( long non-coding RNA,lncRNA)致妊娠糖尿病( gestational diabetes mellitu,GDM)巨大儿发生的作用机制.方法 采用实时荧光定量 PCR(qantitative real-timePCR, qRT-PCR)检测CTD-2012K14.6在GDM和正常胎盘组织中的表达量,并进行胎儿体重相关性分析;运用生物信息分析技术确定CTD-2K14.6调控的下游靶基因,并利用过表达及干扰RNA技术改变CTD-2K4.6在人滋养层细胞系中的表达,及其对下游靶基因表达的调控作用.结果 与正常妊娠胎盘组织相比, CTD-2012K14.6在GDM孕妇的胎盘组织中的相对表达量明显上调(1.70 ± 0.63对1.00 ± 0.56,P＜0.01),且与胎儿体重呈正相关,r=0.850,P＜0.01;在线分析CTD-2012K14.6位于chr16:67,549,214-67,563,958,染色体位置分析发现,CTD-2012K14.6位于CTCF基因的内含子内;过表达CTD-2012K14.6可明显降低CTCF核酸与蛋白表达量,而使胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)核酸与蛋白表达量显著升高;敲除CTD-2012K14.6显著升高CTCF核酸与蛋白表达量,而明显降低IGF-Ⅱ核酸与蛋白表达量.结论 胎盘组织中异常表达的CTD-2012K14.6可能通过调控CTCF,IGF-Ⅱ影响巨大儿发生发展.
