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N型钙粘蛋白文献资料
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ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒的转导对H9C2细胞N型钙粘蛋白的解整合素金属蛋白酶10加工途径的影响
目的 构建ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒,观察其在N型钙粘蛋白底物加工过程中的重要性,为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础.方法 筛选确定ADAM10基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与LentiLox 3.7载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用重组慢病毒转导心肌细胞(H9C2),通过Western blotting检测心肌细胞N型钙粘蛋白及其C-端的CTF1片段的蛋白表达,流式细胞学实验检测N型钙粘蛋白在心肌细胞表面的表达,利用黏附实验检测转染前后心肌细胞黏附能力的变化.结果 成功构建ADAM10 shRNA慢病毒载体,包装慢病毒,转导心肌细胞.与阴性对照组相比,转染组心肌细胞N型钙粘蛋白表达提高,CTF1片段表达减少；细胞表面N型钙粘蛋白的表达增多；心肌细胞黏附能力提高.结论 初步证明心肌细胞中ADAM10在N型钙粘蛋白的加工水解过程中发挥重要作用,为进一步明确该水解途径在维持心肌细胞形态结构和完整性方面所起的作用打下了实验基础.
