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基于Mimox工具分析幽门螺杆菌Catalase模拟表位
目的 利用Mimox软件分析幽门螺杆菌Catalase蛋白模拟表位的性质,并与手工比对结果进行比较.方法 将源于噬菌体随机肽库筛选技术获得的5个Catalase模拟表位输入Mimox网站,参数设定为默认值,进行模拟表位的比对,寻找共同序列并分析其性质.结果 从ClustalW界面比对结果看,氨基酸P、T、S、L、A出现频率较高,通过统计学的方法推导出的共同序列为-[ HST] X[ DST] FRPXA [ TNQ][ LV][FW]T-,其中氨基酸P(80％)和A(60％)的出现频率较高.通过JalView界面推导出的共同序列为-H-DFRP-AT-T-,保守性上氨基酸T(分值8)、P(分值6)、D(分值5)比较高；特性上氨基酸T(分值2.4595077)、P(分值2.235784)、R(分值2.1615076)比较高；共同性(consensus)上氨基酸P(80％)、A(60％)、T(60％)比较高,与先前手工比对得出的结论基本相符.结论 结合噬菌体筛选技术和生物信息学Mimox工具对模拟表位进行分析,可以获得较全面的表位信息.
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消炎三号方对进展期白癜风抗氧化作用的临床研究
目的:探究白癜风发病的氧化应激机制及中药方剂消炎三号方治疗进展期白癜风的抗氧化作用原理.方法:检测和比较稳定期白癜风患者、健康对照组、消炎三号方治疗进展期白癜风患者前后外周血中丙二醛(MalonicDialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的水平.结果:外周血中,进展期白癜风患者较稳定期患者与健康对照组,其MDA水平明显偏高(P＜0.05)、CAT水平明显偏低(P＜0.05).稳定期患者和健康对照组之间外周血MDA、CAT水平无差异性(P＞0.05).经消炎三号方治疗三个月后,进展期患者外周血MDA水平明显下降(P＜0.05),CAT水平明显增高(P＜0.05),与稳定期及健康对照组无差异性(P＞0.05).结论:氧化应激在白癜风发病之初发挥重要作用,消炎三号方可保护黑素细胞抵抗氧化应激损伤.
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幽门螺杆菌Catalas/GST融合蛋白的可溶性表达及凝血酶柱上切割GST标签
目的 利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase/GST融合蛋白,并利用凝血酶柱上切割GST标签.方法 将重组表达质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态中并用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌进行裂解.采用谷胱甘肽琼脂糖树脂Glutathione Sepharose 4B对Catalase/GST融合蛋白可溶性表达上清进行纯化,并同时利用凝血酶柱上切割GST标签,用鼠抗Catalase抗体对纯化产物进行Western blot鉴定.结果 高效表达出相对分子质量约85 kDa的Catalase/GST融合蛋白,以部分可溶性的形式表达,凝血酶柱上成功地切割了GST标签,Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别.结论 成功表达了Catalase/GST融合蛋白并柱上切割了GST标签,为深入研究Catalase的功能奠定了基础.
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幽门螺杆菌Catalase基因的克隆、表达及其抗原性鉴定
目的: 构建含人幽门螺杆菌(H pylori,Hp)过氧化氢酶(catalase,KatA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性.方法: 应用PCR技术从Hp DNA染色体中扩增KatA编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其他Hp菌株的基因序列比较,再将目的基因插入至融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化.纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hp感染患者血清进行Western blot.结果: KatA基因全长为1 515 bp,并在GenBank上登录(No.DQ333889),与GenBank公布的其他Hp菌株的核酸的同源性为96%～97%,表达的KatA融合蛋白的相对分子质量(Mr)为85 000,29株小鼠抗Hp全菌mAb中有4株mAb是针对KatA的,表达产物可被Hp感染患者的血清特异性识别.结论: 重组KatA具有较好的抗原性,为Hp检测试剂和疫苗的研究奠定了基础.
