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四价脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用
目的 制备四价脑膜炎球菌多糖的单克隆抗体,并将其应用于速率散射比浊试验.方法 分别用A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖(meningococcal polysaccharides of group A,C,W135 and Y,分别简写为GAMP、GCMP、GWMP、GYMP)与白喉毒素无毒变异体CRM197结合物(GAMP-CRM 197、GCMP-CRM 197、GWMP-CRM197、GYMP-CRM 197)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株,对阳性细胞株进行特异性检测及纯化抗体效价检测.每种血清群选1株单抗,用于速率散射比浊试验定标.结果 分别获得稳定分泌抗GAMP、GCMP、GWMP、GYMP细胞株20、18、9和13株,其中抗GAMP特异性单抗5株,抗GCMP特异性单抗5株,抗GWMP特异性单抗3株,抗GYMP特异性单抗5株,均与CRM 197及其他3个血清群多糖无交叉反应.抗GAMP纯化抗体效价均＞1∶4000000,抗GCMP纯化抗体效价均＞1∶200000,抗GWMP纯化抗体效价均可达1∶40000,抗GYMP纯化抗体效价均可达1∶40000.抗GAMP单抗6B7和抗GCMP单抗2H4在标准品浓度2～10 μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2分别为0.990 9和0.991 9;抗GWMP单抗5F1在标准品浓度4.33～21.7μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.851 8;抗GYMP单抗7C6在标准品浓度1～8μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.998 7.结论 成功制备了四价脑膜炎球菌多糖特异性单抗,并应用于速率散射比浊试验.
