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人免疫缺陷综合征病毒文献资料
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绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白,为进一步研究其生物学活性及其应用奠定基础.方法 以绿色微囊藻Microcystis viridis NIES-103基因组DNA为模板,PCR扩增MVL基因阅读框序列,并克隆至pET-30b(+)载体中,构建重组表达质粒pET-30b-MVL,经PCR、测序鉴定后,转化感受态E. Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的蛋白采用Ni-NTA亲和柱层析纯化及复性.结果 重组表达质粒pET-30b-MVL序列完整,插入的基因片段全长345 bp,与GenBank中公布的MVL基因序列一致.重组菌的佳诱导表达条件为:诱导起始浓度A600=0.5左右,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导温度37℃,诱导时间4 h,诱导培养基采用LB.以此条件诱导,在相对分子质量约20 000处可见目的 蛋白表达条带,表达量可占菌体总蛋白的47%,且表达蛋白主要以可溶性形式存在.纯化的重组蛋白纯度达95%以上,质谱鉴定为甘露糖结合凝集素.结论 已成功地原核表达并纯化了绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白.
关键词： 微囊藻 凝集素 人免疫缺陷综合征病毒 原核表达 纯化
