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链球菌溶血素与真菌果胶酶融合表达及纯化条件的优化
目的 优化链球菌溶血素(streptolysin O,SLO)与真菌果胶酶(pectin lyase,PL)的融合表达及纯化条件.方法 将活化培养的工程菌以2％接种量接种于发酵液体培养基中,于37℃,200 r/min培养至不同生长期(A600值分别为0.6、0.8和1.0),分别于不同温度(10、15、20、25、30、35和37℃)及加入不同终浓度IPTG(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8和1.0 mmol/L)条件下诱导表达不同时间(6、12、20、24、36、48和60 h).将诱导表达的融合蛋白进行Ni离子亲和层析纯化,对纯化中的上样缓冲液(binding buffer,分别含0、5、10、15、20、25、30 mmol/L咪唑)、清洗缓冲液(washing buffer,分别含0、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L咪唑)及洗脱缓冲液(elution buffer,分别含100、200、500、1 000 mmol/L咪唑)的咪唑浓度进行优化.结果 佳诱导表达条件为:工程菌培养至A600为0.8时,加入0.4 mmol/L IPTG,于20℃诱导24 h,目的蛋白的相对分子质量约91 500,占全菌总蛋白的38.6％,溶血活性可达4.0×107U/ml.佳纯化条件为:binding buffer和washing buffer佳咪唑浓度为5和60 mmol/L,elution buffer 分别使用200和500 mmol/L咪唑进行阶段性梯度洗脱,纯化产物纯度可达95％.结论 成功优化了SLO与PL融合蛋白的表达及纯化条件,纯化后获得了纯度较高的融合蛋白,为进一步研究SLO蛋白的性质及应用奠定了基础.
