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大鼠脂肪源性干细胞来源的施万样细胞的增殖能力
目的:通过检测大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)来源的施万样细胞的增殖能力,探讨其在神经修复再生领域的应用及其意义.方法:取大鼠附睾旁脂肪组织进行ADSCs的分离与培养;将第4代ADSCs在β-巯基乙醇(β-ME)、反式维甲酸(ATRA)、血小板衍生因子AA(PDGF-AA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)和Heregulin-β的联合作用下诱导分化为施万样细胞.采用免疫荧光法、Western blotting法和Real-time PCR法检测施万细胞(SCs)标记物S-100β、P75和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平;采用MTT法检测施万样细胞的增殖能力,观察其有丝分裂增殖现象.结果:诱导分化后的施万样细胞呈梭形、栅栏样排列.S-100β、P75和GFAP蛋白免疫荧光为Cy3/FITC标记,阳性产物位于细胞浆及其突起.Western blotting和Real-time PCR法检测,施万样细胞中S-100β、P75和GFAP蛋白和mRNA表达水平明显高于ADSCs (P＜0.01).MTT法检测,施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力.结论:ADSCs能够成功被诱导分化为施万样细胞,并表达SCs标记物;施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力,可作为神经组织工程理想的种子细胞.
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鼻粘膜干细胞来源施万样细胞与PC12高分化细胞共培养研究
[目的]研究大鼠鼻粘膜来源干细胞(REMSCs)分化为施万样细胞与PC12高分化细胞共培养后髓鞘形成及轴突生长情况.[方法]取大鼠鼻甲组织分离、培养及鉴定REMSCs,使用Heregulin、血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子和Forskolin将REMSCs诱导分化为施万样细胞.将分化后形成的施万样细胞与PC12高分化细胞共培养.倒置显微镜下观察形态,免疫细胞化学染色检测细胞表面标志,电镜观察髓鞘形成能力,Western blot检测MBP.[结果]大鼠REMSCs表达外胚层标志物:nestin,SOX10和Vimentin.REMSCs诱导后形成的施万细胞成双极纺锤状,并且能够在体外持续增殖.倒置显微镜观察到施万样细胞沿PC12高分化细胞轴突生长并且促进PC12高分化细胞轴突延长,电镜显示施万样细胞和PC12高分化细胞形成髓鞘样结构.Western blot显示MBP在共培养3,6,9d呈递增趋势.[结论]从下鼻甲分离的REMSCs诱导后可形成施万样细胞,施万样细胞具有形成髓鞘及促进轴突生长能力.
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施万样细胞对大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响
目的 观察施万样细胞对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响,初步探讨施万样细胞对脊神经节的保护作用.方法 先将脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)诱导分化为施万样细胞并对后者进行鉴定,后将二者分别植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经.大鼠随机分为正常对照组、ADSC组和施万样细胞组.后两组建立SNI模型并用相应的组织工程神经桥接损伤的神经.术后4周采用Western Blot和Real-time PCR检测各组大鼠脊神经节神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白和mRNA的表达.结果 ADSCs能够诱导分化为施万样细胞并表达施万细胞标记物S100β和GFAP蛋白.施万样细胞组大鼠脊神经节内NGF和BDNF蛋白及mRNA表达量均高于ADSC组(P<0.05).结论 施万样细胞可上调脊神经节NGF和BDNF的表达,对SNI所致的脊神经节内神经元损伤有保护作用.
