首页 > 文献资料
-
AQP4基因多态性与视神经脊髓炎遗传易感性的相关研究
目的 初步探讨AQP4外显子区域基因多态性与我国视神经脊髓炎(NMO)患者遗传易感性的关系.方法 用常规酚/氯仿法从患者及正常对照组全血标本中提取基因组DNA,应用PCR扩增AQP4外显子区基因,再对PCR产物进行纯化及正反双向测序,然后通过与GeneBank公布的人类AQP4基因序列比较,寻找阳性突变位点,并比较各阳性突变位点在NMO、MS、CI、NC中突变率的差异.然后通过特异性的定点诱变技术对pEGFP-N1-AQP4质粒诱导相应位点的突变生成相应的突变AQP4质粒,采用脂质体转染法,将相应的质粒转染进入HEK-293T细胞稳定表达后进行NMO-IgG抗体滴度的检测.应用SPSS11.5统计软件进行相关数据分析.结果 我们发现视神经脊髓炎组5号外显子区域有单核苷酸多态性(SNP)位点4个,突变的位点为C9414T、G9416C、A9458C、C9524A,而多发性硬化、脑梗死及正常对照组均未发现相应的SNP位点,同时NMO患者1号外显子区域未发现SNP位点.对不同的SNP位点突变细胞株进行相关检测后发现,组间SNP位点分布的差异有统计学意义(P＜0.05),组间血清抗体滴度水平具有统计学差异(P＜0.05).结论 AQP4基因5号外显子区域共发现了4个阳性突变位点,AQP4基因编码区的变异或多态性可影响靶蛋白AQP4的表达,进而可能参与NMO的发病机制.
-
水通道蛋白4基因对肿瘤坏死因子-α诱导的关节软骨细胞损伤的影响
目的 探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)基因对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α诱导的兔关节软骨细胞损伤的影响.方法 小干扰水通道蛋白4(small interference-aquaporin4,si-AQP4)组由属于小干扰RNAs(small inter-ference RNAs,siRNAs)的si-AQP4靶向抑制AQP4,对照组由小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)经LipofectamineTM 2000转染至分离培养的兔膝关节软骨细胞,采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染后的2组细胞中AQP4的蛋白表达水平.后续研究分为对照组、TNF-α组、AQP4-siRNA组,采用噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumro-mide,MTT)]法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率;western blot法检测与增殖相关的增殖细胞核抗原(prolifera-ting cell nuclear antigen,PCNA)、p21基因,与凋亡相关的survivin基因、Bax基因,与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)相关的MMP-3、MMP-13、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1),与核因子活化B细胞κ轻链增强子(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号通路相关的NF-κB p65和KB抑制蛋白激酶α(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha,IKKα)的蛋白表达水平.结果 转染AQP4-siRNA的兔关节软骨细胞AQP4表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).TNF-α组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).AQP4-siRNA组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均高于TNF-α组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AQP4基因表达可通过抑制NF-κB信号促进兔骨软骨细胞活力、抑制凋亡、抑制MMPs表达,从而对TNF-α诱导的细胞损伤起保护作用.
-
加味人参乌梅汤对Caco-2细胞脱水模型AQP4基因表达的影响
目的:观察加味人参乌梅汤对Caco-2脱水模型AQP4基因表达的影响,初步探讨其生津止泻的作用机制.方法:常规方法建立Caco-2细胞高渗性脱水细胞模型,以不同浓度的加味人参乌梅汤处理,光镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,并采用RT-PCR方法检测各组细胞AQP4基因表达水平.结果:高渗培养基处理Caco-2细胞后,细胞呈现脱水现象,高渗培养液培养3h、6h、12h、24h后脱水模型组的A值均明显低于对照组,AQP4基因表达较正常对照组亦显著降低(P<0.05);用含有不同浓度加味人参乌梅汤的培养液处理细胞,细胞脱水程度明显减缓,且表现出一定的量效关系,各时间点A值均较模型组显著增高,AQP4基因表达较模型组显著增高(P<0.05或0.01).结论:加味人参乌梅汤能显著对抗Caco-2细胞的高渗性脱水损伤,增强AQP4基因表达可能是加味人参乌梅汤益气生津止泻效应的作用靶点之一.
关键词： 加味人参乌梅汤 Caco-2细胞脱水模型 AQP4基因
