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鱼藤酮帕金森病大鼠模型蛋白酶体活性的研究
目的研究鱼藤酮对大鼠大脑蛋白酶体活性的影响.方法采用健康Wistar雄性大鼠,建立鱼藤酮帕金森病模型,对实验组和正常对照组大鼠的黑质区和海马区蛋白酶体的活性进行测量,蛋白酶体活性测定通过蛋白酶体与其3种荧光底物反应,采用荧光分光光度计测量反应物荧光强度而定.结果实验组黑质区蛋白酶体3种活性与对照组相比,蛋白酶体的postacidic活性明显下降(P＜0.05),chymotryptic,tryptic活性有极明显下降(P＜0.01);海马区的postacidic活性无明显下降,chymotryptic,tryptic活性有极明显的下降(P＜0.01);鱼藤酮处理前后黑质区和海马区3种活性下降程度比较,postacidic活性下降值差异无显著性意义(P＞0.05),chymotryptic,tryptic活性下降值差异均有极显著性意义(P＜0.01).结论鱼藤酮对大鼠的黑质区及海马区的蛋白酶体的活性均有损害作用,但对黑质区的损害作用更明显.
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姜黄素通过诱导热休克蛋白70保护多巴胺能细胞
目的 探讨姜黄素通过诱导热休克蛋白70(Hsp70)高表达,抑制α-突触核蛋白的异常表达和聚集,促进蛋白酶体系统降解异常α-突触核蛋白对多巴胺能细胞的保护作用.方法 选用大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PCI2细胞),鱼藤酮诱导其损伤建立帕金森病细胞模型,利用姜黄素进行干预:采用MTT法检测细胞活力,荧光酶标仪检测蛋白酶体水解酶活性,Western blot检测Hsp70和α-突触核蛋白的表达,免疫荧光法检测细胞内Hsp70的表达和α-突触核蛋白的聚集.结果 鱼藤酮组PC12细胞活力及蛋白酶体水解酶活性明显降低,Hsp70的表达轻度增加,α-突触核蛋白表达和聚集明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).经不同浓度姜黄素预处理4h后与0.1 μmol/L鱼藤酮共同孵育PC12细胞24 h,与鱼藤酮组比较,0.5 μmol/L和1.0 μmol/L姜黄素使细胞活力以及蛋白酶体水解酶活性明显升高,Hsp70表达明显升高,α-突触核蛋白的表达和聚集明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);5.0 μmol/L和10 μmol/L姜黄素对鱼藤酮的拮抗作用明显减弱,细胞活力与鱼藤酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05),胰蛋白酶、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性与鱼藤酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05);10 μmol/L姜黄素组糜蛋白酶样水解酶活性进一步降低,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 低浓度姜黄素能够通过诱导PC12细胞表达Hsp70,诱导蛋白酶体水解酶活性表达,进而抑制α-突触核蛋白的表达和聚集,从而拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞的损伤.
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藤黄酸对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的抑制作用及其分子机制
目的 观察藤黄酸(GA)对肾癌786-O细胞活力和对HUVEC细胞血管形成能力的影响及其分子机制.方法 不同浓度的GA处理786-O细胞一定时间后,分别采用Alamar blue法、流式细胞术和免疫印迹,检测GA对786-O细胞活力、周期分布、凋亡率及凋亡标志物聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)降解片段的影响;GA对HUVEC细胞的作用除进行上述检测外,还利用划痕实验法和Transwell小室法检测细胞横向及纵向迁移能力变化,反映GA对HUVEC细胞血管形成能力的影响;免疫印迹检测P21Waf1/Cip1、Bax、缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和泛素化蛋白;特异性荧光蛋白酶体底物肽降解法检测细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性.结果GA能够剂量依赖性抑制786-O和HUVEC细胞的活力、诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,同时增加P21Waf1/Cip1、Bax和泛素化蛋白水平;能够减弱HUVEC细胞横向和纵向迁移能力,伴随HIF-1α的稳定性增加和VEGF表达下调;能够抑制细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性.结论GA通过诱导细胞G2-M周期阻滞和凋亡而显著抑制786-O和HUVEC细胞活力,并能有效抑制HUVEC细胞血管形成能力,其机制可能与蛋白酶体活性抑制所导致的底物蛋白P21Waf1/Cip1、Bax和HIF-1α的稳定性改变,及HIF-1α调控的下游蛋白VEGF表达水平的变化有关.
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泛素—蛋白酶体通路与疾病发生的研究进展
泛素-蛋白酶体通路(UPP)由泛素、蛋白酶体及3个相关的酶组成,是体内蛋白质降解的途径之一.蛋白酶体活性测定方法、UPP调控蛋白酶体活性、UPP与神经退行性疾病和恶性肿瘤发生、发展及治疗的关系是目前研究的热点.
