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PEX基因对肿瘤细胞生物学性状的影响
目的探讨PEX基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响.方法利用脂质体介导转染法,经G418稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察PEX基因对B16F10细胞生物学性状的影响.结果BpcDNA-sPEX、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P＞0.05);BpcDNA-sPEX组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P＜0.01),BpcD-NA-sPEX组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA-sPEX组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P＜0.01).结论PEX基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;PEX基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力.
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PEX 基因对 C6胶质瘤干细胞增殖作用影响的研究
目的：探讨PEX基因对大鼠C6胶质瘤干细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用传统的血清培养基培养C6胶质瘤细胞系，再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养。采用免疫荧光染色分离鉴定脑肿瘤干细胞（BTSCs），应用本实验室成功构建的重组子pDsRed2-C1-PEX以脂质体为介导转染体外培养的BTSCs ．RT-PCR验证真核表达载体在BTSCs中的表达。 MTT法观察PEX对BTSCs增殖活性的影响，并用流式细胞仪检测胶质瘤干细胞的细胞周期变化。结果成功培养出BTSCs 并成功转染， PEX在BTSCs中高表达并且其对体外培养的BTSCs的增殖有明显抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期显示：BTSCs-PEX转染组细胞周期G0/G1期细胞百分数明显升高为81．10％，S期细胞百分数明显降低为12．04％，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 PEX基因可以在BTSCs中表达，并且能直接抑制体外培养的BTSCs的生长增殖。
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PEX基因修饰骨髓间质干细胞对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨PEX基因修饰的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对C6胶质瘤细胞的作用及机制.方法 分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体并转染MSC,G418筛选获取稳定表达PEX基因的MSC(MSC-PEX),将不同数量的MSC-PEX细胞与C6胶质瘤细胞进行共培养试验,用水溶性四氮唑法(WST-1)观察MSC-PEX对C6胶质瘤细胞增殖的影响,用Annexin-V-FITC/PI双染荧光观察C6胶质瘤细胞凋亡的形态学变化,并用Annexin-V-FITC/PI双标记法通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞凋亡率.结果 成功获得稳定表达PEX基因的MSC-PEX,MSC-PEX抑制C6胶质瘤细胞的生长作用较明显,Annexin-V-FITC/PI双染荧光发现C6胶质瘤细胞发生凋亡形态改变;流式细胞仪检测显示:MSC-PEX转染组和DMEM对照组的凋亡率分别为16.7%和1.3%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PEX基因修饰的骨髓间质干细胞抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡,为胶质瘤的治疗奠定理论基础.
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PEX基因对C6胶质瘤干细胞MMP-2和VEGF表达的影响
目的 探讨PEX基因对C6胶质瘤干细胞(GSCs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养.采用单细胞克隆和免疫荧光染色分离鉴定GSCs,运用本实验室成功构建的重组子pDsRed2-C1-PEX,以脂质体为介导转染体外培养的GSCs,逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检验真核表达载体在GSCs中的表达及PEX基因对GSCs表达MMP-2mRNA、VEGFmNA的影响.结果 成功培养出GSCs并成功转染,PEX在GSCs中高表达并且体外对MMP-2、VEGF的表达有明显抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PEX基因可以在GSCs中表达,并且体外可以抑制MMP-2和VEGFmRNA在GSCs中的表达,为胶质瘤的治疗奠定理论基础.
