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严重急性呼吸综合征( SARS)文献资料
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SASR-CoV核衣壳蛋白在杆状病毒-昆虫系统的克隆表达及抗原性分析
目的：SARS冠状病毒（ SARS-CoV）核衣壳蛋白（ N蛋白）在杆状病毒-昆虫系统的表达，研究其抗原性。方法：利用PCR方法扩增SARS-NP全长基因，使用BamHⅠ和Sal Ⅰ限制性内切酶定向插入Bac-to-Bac系统的pFastBac HTC载体，构建重组质粒转化DH10 Bac细胞，获得重组杆粒DNA后转染Sf9细胞，在High Five细胞中表达SARS-NP；表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化及免疫印迹和ELISA方法验证抗原性。结果：成功构建pFastBac HTC-SARS-NP重组质粒，并在High Five细胞高效表达，获得相对分子量约48 kD的重组蛋白质。经验证，重组蛋白能被SARS-CoV NP的特异性单抗（8E1A17）和兔免疫血清识别，能与SARS患者血清反应，与健康人血清、人冠状病毒229 E型和OC43型的杂交瘤培养上清、相对应的兔免疫血清、患者血清均无交叉反应，具良好抗原反应性。结论：SARS-NP成功表达于杆状病毒-昆虫系统，具较强抗原反应性，初步认为其与229 E型和OC43型感染血清无交叉反应性。
