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BALB/c小鼠急、慢性弓形虫感染时Th细胞应答的基因表达谱分析
目的:分析弓形虫感染BALB/c小鼠后诱导Th细胞应答的基因表达谱特征.方法:以刚地弓形虫速殖子感染BALB/c小鼠,分别于感染后第6天和第12天各处死小鼠2只,制备小鼠脾细胞悬液并混合,提取细胞总RNA.采用基因芯片技术检测小鼠Th细胞应答各相关基因的表达情况,并对部分表达变化的基因应用Real time-PCR予以验证.结果:BALB/c小鼠感染弓形虫后,基因芯片检测共有20种基因表达差异超出2倍以上.感染后第12天比第6天,8种基因(Gata-3、Ccr3、Ccr4、Bcl6、Nfatc1、CD80、Fos、CD69)表达上调,12种基因(T-bet、CIITA、Irf1、Mapk9、Nfatc3、Fasl、Tyk2、Lat、Mapk10、Socs3、Socs6、Yy1)表达下调.总体呈现Th2型免疫应答基因上调,Th1型免疫应答基因呈下调趋势.Gata-3和T-bet基因的Real time-PCR检测结果与基因芯片检测一致.结论:从基因表达谱分析来看,BALB/c小鼠感染弓形虫后在感染急性期以Th1细胞应答为主,度过急性期后以Th2细胞应答为主.
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BALB/c小鼠感染弓形虫后Thl/Th2免疫漂移的实验研究
目的:动态分析BALB/c小鼠感染弓形虫后Thl/Th2免疫失衡及免疫漂移特点,并探讨转录因子T-bet和GA.TA-3在此过程中的改变及其意义.方法:90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组30只,弓形虫感染组60只.于感染后奇数天每天处死感染组小鼠2只,对照组小鼠1只,采用ELISA法动态检测各组小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平,同时应用荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞中T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况.结果:感染组小鼠中,血清IFN-γ于感染后第4天开始显著升高,第5~7天维持在高峰值,从第8天开始下降,第9天降至正常水平;IL-4于感染后第8天开始显著升高,第9天升至峰值,从第14天开始下降,第15天降至正常水平;脾细胞T-bet mRNA的表达在感染后第3天升高,第5天达高峰后于第9天降至正常水平;脾细胞GATA-3 mRNA的表达在感染后第7天升高,第11天达高峰,于第13天降至正常水平.正常对照组小鼠在实验期内IFN-γ、IL-4水平没有明显变化,维持在正常的较低水平.结论:BALB/c小鼠感染弓形虫后诱导的免疫应答在感染急性期(第1-8天)以Th1应答为主,第9至13天,宿主免疫应答以Th2细胞应答为主,之后Thl/Th2应答基本恢复平衡.Thl应答向Th2应答的漂移与T-bet和GATA-3 mRNA的表达相关并受其调控,Thl/Th2型免疫应答的发生时相和效应强度可能影响弓形虫感染的终结局.
