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单链构象多态性技术(SSCP)文献资料
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SSCP在寡核苷酸适配子ssDNA多克隆筛选中的应用
目的 利用单链构象多态性技术弥补SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)实验在寡核苷酸适配子克隆、测序环节中的不足,减少SELEX实验的环节.方法 利用单链构象多态性技术(singel-strand conformation polymorphism,SSCP)将多轮SELEX筛选的198个寡核苷酸适配子克隆在测序前进行SSCP筛查.结果 对198个克隆的SSCP电泳条带位置分析,挑选出58个克隆测序.SSCP筛查得到有效克隆的检出率为20.69%,是不用SSCP筛查检出率6.07%的3.4倍;如果去除组间误差,有效克隆的检出率44.44%是不用SSCP筛查检出率的7.32倍.结论 通过对198个克隆的20批次SSCP电泳筛查,并经58个克隆测序后的实验结果证明:同一SSCP电泳胶片上电泳条带泳动位置相同的克隆片段,基因序列相同;电泳条带泳动位置不同的片段,基因序列不同.根据SSCP电泳条带泳动位置,挑选有代表性的克隆测序,避免对多克隆盲目测序,为多克隆测序前的筛查探索一条新的途径.
