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雌激素合成与子宫内膜异位症的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMS),简称内异症,现代定义为内膜细胞在异位生长、发育、出血并引起症状[1].其典型的临床症状为慢性盆腔痛、性交痛及不孕.根据内膜异位的位置不同,EMS主要分为卵巢内异症、腹膜内异症与深部浸润型内异症,其中深部浸润型内异症被认为是严重的形式.
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DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成
目的 转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制.文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子.方法 通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因cDNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按AdMax系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装.按NE-PERTM Nuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离.KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-LacZ),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测.采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度.采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长cDNA序列,并分别亚克隆至pCS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和pFLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中.采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中.收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验.通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/DnaJ家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平.结果 Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞mGC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达.免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中.腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源Flag-DNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌二醇的合成,与Ad-LacZ(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)减少,KGN细胞中雌二醇的合成[(10749.0±801.7)pg/mL vs(79030.±409.5)pg/mL,P<0.01],而细胞核中高表达Flag-DNAJB11后则刺激KGN细胞中雌二醇的生成,与Ad-LacZ(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)刺激雌二醇的生成[(10749.0±801.7)pg/mL vs(14217.0±1218.0)pg/mL,P<0.01].免疫共沉淀实验表明当Myc-tagged FOXL2与Flag-tagged DNAJB11分别共转染HEK 293细胞,FOXL2与DNAJB11可以相互免疫共沉淀对方,荧光素酶报告基因实验进一步表明细胞核中表达的DNAJB11显著增强FOXL2介导的Cyp19A1启动子活性和Cyp19A1蛋白表达.结论 DNAJB11是转录因子FOXL2新的结合分子并调控FOXL2蛋白的稳定性与转录活性.
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子宫内膜异位症与雌激素合成相关酶的研究
研究发现子宫内膜异位症表现为局部雌激素合成的亢进,从而促进局部异位病灶的形成,局部雌激素合成与代谢在子宫内膜异位症的发生、发展以及预后过程中发挥重要作用,对内异症局部雌激素合成相关酶的深入研究,有助于揭示子宫内膜异位症的发病机制,以及为子宫内膜异位症提供新的有效的治疗靶点.本文就雌激素合成代谢的相关酶与子宫内膜异位症关系进行综述.
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罗氏内异方对子宫内膜异位症局部雌激素合成影响的实验研究
目的:从雌激素合成角度探讨子宫内膜异位症(简称内异症)的发病机制,以达那唑作为对照,探索罗氏内异方对内异症模型雌激素合成调节网络的影响.方法:建立大鼠内异症模型,分别给予高、低剂量罗氏内异方以及达那唑治疗,以空白模型组作对照.3周后切除异位内膜病灶,检测前列腺素E2(PGE2)、雌二醇(E2)含量和即刻早期表达基因(C-FOS)、小鸡卵白蛋白上游启动子转录因子(COUP-TF)、类固醇合成因子(SF-1)、细胞色素芳香化酶P450(P450arom)的mRNA表达水平.结果:各用药组中,中药2组的粘连程度轻,罗氏内异方低剂量组的囊肿小.与空白模型组比较,各用药组的大鼠异位内膜组织E2和PGE2含量均明显下降,C-FOS表达量明显减弱；2组大鼠异位内膜组织P450arom表达量明显减弱,罗氏内异方低剂量组与高剂量组、达那唑组比较则明显减弱.与其他组比较,罗氏内异方低剂量组大鼠异位内膜组织SF-1表达量明显减弱,各组间大鼠异位内膜组织COUP-TF表达量差异无显著性意义.空白模型组异位内膜的E2含量与PGE2含量、P450arom、C-FOS表达量呈显著正相关,而与COUP-TF表达量呈显著负相关；PGE2含量与P450arom表达量呈显著正相关；P450arom与SF-1表达量有显著的正相关.结论:研究证实,异位内膜局部通过SF-1-P450arom-PGE2介导雌激素合成和C-FOS对雌激素早期应答两种独立途径,使局部的E2浓聚,促进内异症发生发展.同时提示罗氏内异方在一定浓度范围内通过抑制SF-1的表达和C-FOS的表达,使局部E2含量下降,从而抑制异位内膜病灶的发展.
