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碱性成纤维生长因子对颅缝细胞成骨分化的影响
目的 探讨碱性成纤维生长因子(FGF-2)对颅缝细胞成骨方向分化的影响.方法 ①获取新生SD大鼠颅骨矢状缝及冠状缝处颅缝细胞.②添加不同浓度FGF-2,观察颅缝细胞ALP染色、ALP活性及成骨标志物(osteocalcin,OC)表达量,了解不同浓度FGF-2对颅缝细胞向成骨分化的影响.结果①各浓度FGF-2作用于颅缝细胞后,ALP染色、活性均较对照组减弱(P ＜0.05).其中10ng/ml FGF-2诱导的细胞ALP受到的抑制弱.②各浓度FGF-2作用于颅缝细胞后,OC表达量均较对照组增加(P ＜0.05).其中10ng/mlFGF-2诱导的细胞其OC表达量高.结论 ①FGF-2抑制颅缝细胞早期成骨标志物ALP的表达,而增强晚期成骨标志物OC的表达.②较低浓度的FGF-2(10ng/ml)对ALP抑制作用弱,对OC促进作用强,利于促进颅缝细胞向成骨方向分化.
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重组Periostin蛋白对TWIST1+/-小鼠颅缝细胞增殖以及成骨分化能力的影响
目的 观察不同浓度Periostin重组蛋白对体外培养的TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝细胞增殖及成骨分化的影响.方法 取TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝细胞,培养传代后随机分成4组,并分别加入不同浓度的重组Periostin蛋白(0μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)进行培养.采用CCK8法检测该蛋白对颅缝细胞增殖的影响;碱性磷酸酶定量试剂盒检测细胞内ALP的分泌;RT-PCR及Western Blot法检测细胞内成骨分化相关因子基因和蛋白的表达.结果CCK8法检测结果显示,与0μg/L组相比,Periostin 50μg/L、100μg/L、200μg/L浓度组分别培养1、3、5、7 d后,颅缝细胞活性均显著降低(P<0.05);碱性磷酸酶试剂盒检测结果显示,与0μg/L组相比,Periostin 50μg/L、100μg/L、200μg/L浓度组分别成骨诱导培养10 d后,ALP活性被抑制,表达量下降(P<0.05);RT-PCR和Western Blot检测结果显示,成骨诱导培养21 d后,与0μg/L组相比,Periostin 50μg/L、100μg/L、200μg/L浓度组颅缝细胞成骨分化相关因子OCN、OPN、BSP、COL-1表达量下降(P<0.05).结论 不同浓度 (50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L) 的重组 Periostin 蛋白对TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝细胞增殖、分化均有明显抑制作用.
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SD大鼠颅缝细胞不同时期GPC3基因表达变化的研究
目的：探索GPC3基因在颅缝组织和细胞中不同时期的表达情况，为后续的疾病模型研究提供参照。方法研究并观察1 d、3 d、7 d的SD大鼠颅缝细胞组织，应用组织切片免疫荧光染色、RT-qPCR、Western Blot等方法，检测其在不同年龄SD大鼠中的表达水平，判断其与颅骨成骨及颅缝闭合的关系。结果免疫荧光显示，GPC3在大鼠未闭合颅缝组织不同阶段胞内、细胞表面及胞外均有表达；RT-qPCR、Western Blotting结果显示，GPC3基因表达随着大鼠年龄增长呈现下降趋势。结论 SD大鼠中，GPC3与颅缝闭合密切相关。
关键词： 颅缝细胞 SD大鼠 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3
