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镍钛合金丝对大鼠心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体的影响
背景：虽然镍钛合金封堵器置入治疗先天性心脏病具有较好的临床效果，但后期发生心律失常并发症的概率较大。目的：观察镍钛合金对大鼠心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体表达的影响。方法：取30只SD大鼠，随机均分为2组，实验组于心尖部植入镍钛合金丝，对照组不做任何处理特殊处理，术后1，3，6个月取材，采用RT-PCR检测心肌细胞肌浆网钙泵与雷尼丁受体基因的表达，采用免疫组化检测心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体蛋白的表达，采用苏木精-伊红染色检测炎症反应情况。结果与结论：实验组镍钛合金植入大鼠心肌后，炎症细胞浸润，引发炎症反应，伴纤维组织增生，随着植入时间延长，炎症反应逐渐消失；对照组未见炎细胞浸润。两组术后不同时间点的心肌细胞肌浆网钙泵、雷尼丁受体基因表达比较差异无显著性意义，相应的蛋白表达比较差异也无显著性意义。表明镍钛合金丝不影响心肌细胞肌浆网钙泵、雷尼丁受体的表达，提示镍钛合金封堵器相关心律失常可能与肌浆网钙泵、雷尼丁受体蛋白表达异常机制关系不大。
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慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体及集钙蛋白的表达
目的:研究慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体(RyR2)及其调节蛋白集钙蛋白的表达,探讨心衰心肌细胞内钙容量降低的机制.方法:雄性SD大鼠被随机分为心衰组和假手术组,运用激光扫描共聚焦显微镜、透射电子显微镜、免疫印迹等方法研究2组大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量、心肌细胞超微结构及心肌细胞内肌浆网钙释放通道RyR2和其调节蛋白集钙蛋白表达的变化.结果:慢性心衰大鼠心功能左心室舒张末期压力、左室压力大上升速率均显著低于假手术组.假手术组大鼠心肌细胞的肌小节完整,肌丝排列整齐,线粒体结构正常;心衰组大鼠部分心肌细胞肌丝溶解,线粒体肿胀,嵴断裂.慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量显著低于假手术组.慢性心衰大鼠心肌细胞内RyR2的表达量无明显变化,集钙蛋白表达明显下降.结论:慢性心衰大鼠心肌细胞内集钙蛋白表达下调,可能是导致心肌细胞肌浆网钙容量减少的原因之一.
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pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体的构建及扩增
目的 构建并扩增pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体.方法 目的基因全基因合成,PCR加入酶切位点,连接入pGEM-T easy载体,经酶切鉴定及测序后获得测序正确的目的基因.连接入真核表达载体pcDNA3.1(-),再经酶切鉴定及测序后进行peDNA3.1-FKBP12.6的扩增.结果 成功构建并扩增pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体.结论 pCDNA3.1-FK-BP12.6表达载体的构建,为深入研究FKBP12.6基因对心肌细胞结构和功能的影响奠定基础,进而为探索安全、高效的心肌功能异常的治疗提供新的途径.
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慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体及其调节蛋白Calstabin2表达异常的研究
目的 研究慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网雷尼丁受体及其调节蛋白FK506结合蛋白(Calstabin2)的异常表达.方法 雄性SD大鼠25只,按照3:2的比例随机分为心衰组(15只)和假手术组(10只),运用激光扫描共聚焦显微镜、Western-blot等方法研究2组大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量及钙释放通道雷尼丁受体(RyR2)和其调节蛋白Calstabin2表达的变化.结果 慢性心衰大鼠心功能LVEDP(8.91±2.16) mmHg、dp/dtmax(2 250.19±172.44) mmHg/s,显著低于假手术组大鼠心功能LVEDP(4.17±1.15) mmHg、dp/dtmax (4 822.54±221.62) mmHg/s(P＜0.05);慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量△F/F0=25.3±2.8,显著低于假手术组大鼠肌浆网内钙容量△F/F0=47.8±3.5(P＜0.05);慢性心衰大鼠心肌细胞内Calstabin2的表达较对照组下调.结论 Calstabin2的表达下调所致RyR2稳定性下降是导致心衰的原因之一.
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慢性心衰大鼠心肌细胞内异常的钙通道研究
目的 研究慢性心衰大鼠心肌细胞内异常的钙通道.方法 将雄性SD大鼠被随机分为手术组和假手术组,运用激光扫描共聚焦显微镜、Western-blot等方法研究胞浆内咖啡因诱导钙瞬变及钙释放通道RyR2和其调节蛋白FKBP12.6表达的变化.结果 慢性心衰大鼠心肌细胞内钙瞬变(△F/F0=11.9 ±0.9)显著低于对照组大鼠心肌细胞内钙瞬变(AF/F0 =33.2±1.6,P＜0.05);慢性心衰大鼠心肌细胞内FKBP12.6的表达较对照组下调.结论 FKBP12.6表达下调所致Ca2+泄漏是导致心衰的原因之一.
