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乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架的细胞相容性及缓释作用
目的:体外实验观察生物可降解材料乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架的细胞相容性及其缓释作用.方法:实验于2005-05/09在首都医科大学附属北京市神经外科研究所损伤修复实验室完成.①实验方法:乙交酯-丙交酯共聚物采用专利技术(200510011350.9)制备,体外将许旺细胞和神经干细胞与乙交酯-丙交酯共聚物共培养.②实验评估:扫描电镜下观察许旺细胞和神经干细胞在乙交酯-丙交酯共聚物内生长状况;应用组织工程技术将神经生长因子整合入乙交酯-丙交酯共聚物内,0.02 g乙交酯-丙交酯共聚物(干质量)中含有1μg神经生长因子,ELISA法检测每天神经生长因子释放的质量浓度.结果:①扫描电镜下乙交酯-丙交酯共聚物横断面可见其为网格状,纵断面可见其直孔道.②许旺细胞和神经干细胞在乙交酯-丙交酯共聚物支架上生长良好,与其紧密贴附.③培养后第4天神经生长因子释放的质量浓度达峰值,第7天趋于平稳,稳定释放的质量浓度为100μg/L.结论:①乙交酯-丙交酯共聚物与许旺细胞和神经干细胞具有良好的生物相容性及细胞亲和性.②按神经生长因子(1μg)与乙交酯-丙交酯共聚物(干质量0.02 g)的比例合成的神经生长因子-乙交酯-丙交酯共聚物组织工程材料可缓慢稳定释放神经生长因子,达到其可以发挥生物学活性的质量浓度100μg/L.
关键词： 许旺细胞 神经干细胞 乙交酯-丙交酯共聚物 组织工程 神经生长因子 -
乙交酯-丙交酯共聚物-细胞复合体移植治疗脊髓损伤
目的:观察神经干细胞、许旺细胞和组织工程支架材料乙交酯-丙交酯共聚物于大鼠髓内共移植后的生物相容性,及其对大鼠损伤脊髓形态和功能的修复作用.方法:实验于2005-05/2006-09在首都医科大学附属北京市神经外科研究所损伤修复实验室完成.①实验材料:健康成年雌性Wistar大鼠36只,随机数字表法分为单纯支架组、神经干细胞+支架复合体组、神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组,12只/组.乙交酯-丙交酯共聚物由中科院化学研究所医用高分子材料中心提供.②实验方法:各组大鼠均建立脊髓T9半横断损伤模型.神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组取2×1010L-1的许旺细胞、神经干细胞各10μL接种于乙交酯-丙交酯共聚物支架内,神经干细胞+支架复合体组取2×1010L-1的神经干细胞10μL接种于乙交酯-丙交酯共聚物支架内,单纯支架组取10μL DMEM培养液置于乙交酯-丙交酯共聚物支架内,于脊髓缺损处分别植入对应的复合物.③实验评估:应用电镜观察乙交酯-丙交酯共聚物支架的降解及轴突的再生状况;应用BBB评分和电生理技术检测大鼠脊髓功能性的恢复情况.结果:36只Wistar大鼠均进入结果分析.①行为学观察结果:移植术后4,12周,神经干细胞+支架复合体组、神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组大鼠的后肢运动功能BBB评分均好于单纯支架组(P＜0.01),其中神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组尤为明显.②神经电生理检查结果:在脊髓半横断损伤后即刻,所有动物的体感诱发电位和运动诱发电位波幅都明显减低甚至消失.移植术后4周,神经干细胞+支架复合体组、神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组大鼠的体感诱发电位和运动诱发电位波幅均有所恢复;至移植术后12周恢复明显.单纯支架组移植术后4,12周体感诱发电位和运动诱发电位波幅无明显变化.③电镜观察结果:扫描电镜下,随着时间的延长各组植入的乙交酯-丙交酯共聚物逐渐降解.透射电镜下,各组植入材料正中横断面可见新生的无髓及有髓神经纤维,至12周时神经干细胞+许旺细胞+支架复合体组明显.结论:乙交酯-丙交酯共聚物在大鼠损伤的脊髓内具有良好的生物相容性;其与神经干细胞、许旺细胞共移植能够明显促进脊髓半横断损伤大鼠的脊髓轴突再生,并改善肢体的运动功能.
关键词： 脊髓损伤 神经干细胞 许旺细胞 乙交酯-丙交酯共聚物 生物相容性 -
乙交酯-丙交酯共聚物/神经生长因子复合支架植入大鼠损伤脊髓后的髓鞘再生
背景:前期体外实验已经证明神经生长因子乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架具有良好的细胞黏附亲和性;同时观察到其随时间推移可稳定释放神经生长因子.目的:将生物可降解材料乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架移植入大鼠脊髓半横断损伤动物模型中,观察其对脊髓损伤髓鞘再生的影响.设计,时间及地点:随机对照动物实验,于2006-05/07在首都医科大学附属北京市神经外科研究所损伤修复实验室完成.材料:乙交酯-丙交酯共聚物与神经生长因子复合支架材料,其中0.02 g乙交酯-丙交酯共聚物中含有1 μg神经生长因子.方法:45只成年Wistar大鼠制备T8～9脊髓半横断损伤模型,随机分为单纯支架组20只和复合支架组25只,分别移植乙交酯-丙变酯共聚物支架和掺有神经生长因子的乙交酯-丙交酯共聚物支架.主要观察指标:于术后1,4,8和12周进行髓鞘碱性蛋白免疫组织化学及超微结构检测观察髓鞘再生的情况.结果:复合支架组苏木精-伊红染色观察脊髓损伤程度较单纯支架组明显减轻.复合支架组髓鞘碱性蛋白免疫组织化学阳性颗粒明显多于单纯支架组.透射电镜观察复合支架组大鼠新生髓鞘明显多于单纯支架组.结论:乙交酯-丙交酯共聚物联合神经生长因子促进髓鞘再牛的效果优于单纯乙交酯-丙交酯共聚物.
关键词： 脊髓损伤 神经生长因子 组织工程 乙交酯-丙交酯共聚物 移植 -
乙交酯-丙交酯共聚物精制过程中有机锡的去除方法
在乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)精制过程中,比较了采用稀酸溶液和有机溶剂为萃取剂对聚合物中有机锡的去除效果,并考察了以有机溶剂为萃取剂时各工艺参数对精制效果的影响.结果表明,将PLGA溶于乙腈中配成1％的溶液后用等体积石油醚萃取3次,所得产品中锡残留量低于10 μg/g.该法能有效避免酸性条件下PLGA的降解,不使用无机酸.
关键词： 乙交酯-丙交酯共聚物 精制 萃取 有机锡 -
阿昔洛韦-乙交酯-丙交酯共聚物毫微粒制备工艺的优化选择
目的:筛选制备阿昔洛韦-乙交酯-丙交酯共聚物毫微粒(ACV-PLGA-NP)的优化工艺.方法:单因素试验初选制备ACV-PLGA-NP的pH值范围、聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol,PVA)浓度范围、PLGA分子量、药物及丙酮浓度范围.按均匀设计表设计实验,进行结果预测及验证.结果:优化工艺与367%分子量及丙酮浓度无关,Ph值为1.5,PVA浓度为50mg/ml,ACV浓度为0.8mg/ml.按优化条件制备的ACV-PLGA-NP平均包封率为61.00%,载药量为6.79%.结论:按照均匀设计法优选的条件制备ACV-PLGA-NP,其目标量在预测值范围内.
关键词： 阿昔洛韦 乙交酯-丙交酯共聚物 毫微粒 均匀设计 -
含姜黄素的(丙交酯-乙交酯)共聚物薄膜对血管平滑肌细胞增殖的影响
血管支架内再狭窄一直是困扰经皮冠状动脉介入治疗的主要问题,药物洗脱支架的临床应用显著降低了术后再狭窄率而成为冠心病介入治疗新的里程碑.由于姜黄素具有抗炎和抗增生等药理活性而有望应用于药物洗脱支架.本文采用四唑蓝比色法测定了大鼠血管平滑肌细胞对不同浓度姜黄素的药物敏感性,实验结果表明,姜黄素的浓度范围为2.5～10 μg/ml时,对平滑肌细胞的抑制率大于80%.再以可降解高分子材料丙交酯-乙交酯共聚物(poly (lactic acid-co-glycol acid),PLGA)为载体分别制备了三种姜黄素浓度(3wt%,5wt%,8wt%)的复合薄膜.乳酸脱氢酶的释放检测结果显示这三种载药薄膜对平滑肌细胞没有急性的毒性反应.采用Alamar Blue法分别研究了三种浓度含姜黄素的PLGA薄膜和平滑肌细胞经3 d和7 d共培养后的细胞活性,表明三种浓度的含姜黄素薄膜均能够显著抑制平滑肌细胞增殖,尤其当薄膜中姜黄素浓度为8wt%时,细胞活性值低,抑制作用明显.
关键词： 姜黄素 乙交酯-丙交酯共聚物 抗增生 支架内再狭窄
