首页 > 文献资料
-
胰蛋白酶法和Trilon X-100法脱猪软骨细胞的比较
背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要背景:作为修复软骨缺损的一种材料,脱细胞软骨基质已受到越来越多研究者的关注,但是制备脱细胞软骨基质的两种主要方法其脱细胞效果孰优孰劣尚不清楚.目的:对比胰蛋白酶法和Triton X-100法脱猪关节软骨细胞的效果.设计、时间及地点:对比观察,于2008-03/07在山西医科大学第二医院骨科中心实验室完成.材料:新鲜猪膝、髋关节软骨市场上购得.方法;选取新鲜猪关节软骨片分别置入2.5g/L胰酶溶液和2.5 g/L Triton X-100溶液中脱细胞处理,并以未经处理的新鲜软骨片作对照.主要观察指标:①大体观察脱细胞后关节软骨的外观形态.②免疫组织化学染色及扫描电镜下观察两种脱细胞方式对细胞外基质胶原的影响.③每组随机选取10片软骨片进行加载、卸载试验和拉断试验,测定断裂强度和断裂拉伸率.结果:①经过两种方法脱细胞后,软骨脱细胞基质在外观上与未脱细胞软骨差别甚微,只是颜色较软骨略白,触摸较未脱细胞基质柔软.②免疫组织化学染色及扫描电镜可见,胰酶法和Triton X-100法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,胰酶法观察到胶原排列有序,纹理清晰,可见胰酶在脱细胞的同时对细胞外基质没有明显的破坏;Triton X-100法观察到胶原仍比较多,但纹理结构有些紊乱,可能是Triton X-100法脱细胞对细胞外基质进行了破坏.③新鲜关节软骨组、胰酶组和Triton X-100组断裂强度和断裂拉伸率相比,差异均无显著性意义.结论:两种方法均彻底脱去了关节软骨上的细胞成分,脱胰酶法脱猪关节软骨细胞的方法作用时间较短,胶原保存好,且成本较低.Triton X-100法脱细胞步骤较多,时间较长,对胶原结构有轻微的破坏,但对软骨的力学性能没有显著影响.
关键词： 组织工程 胰蛋白酶 triton X-100 脱细胞软骨 -
β-磷酸三钙-脱细胞软骨支架复合兔BMSCs修复膝关节软骨缺损的实验研究
目的 观察纳米磷酸三钙人工骨( β-TCP)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、脱细胞耳软骨(DC)复合软骨细胞修复关节软骨缺损的效果.方法 获取新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),培养并体外诱导成软骨细胞,取异体兔耳软骨进行脱细胞处理,与β -TCP形成复合支架作为载体接种软骨细胞,加入TGF-β和IGF-Ⅰ修复膝关节软骨缺损.实验动物(n=18)分为3组,实验组(n=8)复合支架加入TGF-β和IGF-Ⅰ,对照组(n=6)仅以复合支架修复缺损,空白组(n=4)不加入任何修复材料.结果 BMSCs在体外生长稳定,增殖能力强,可被诱导为软骨细胞.软骨支架脱细胞完整,软骨陷窝排列有序,复合物植入缺损后第20周,实验组缺损内充填白色半透明新生软骨组织,色泽与正常软骨相似,与周围正常软骨连接良好.结论 β-TCP-DC复合支架有较多的孔隙结构,降解速度快,组织相容性及细胞黏附性好,是组织工程修复关节软骨理想的种子细胞载体.
-
微粒软骨脱细胞基质复合纤维蛋白凝胶构建软骨组织工程支架材料的研究
目的:应用异体微粒软骨脱细胞基质与纤维蛋白凝胶结合作为可注射性支架材料,进行体内构建良好可塑性和生物特性的组织工程化软骨.方法:制备普通家猪耳廓软骨微粒脱细胞基质,与体外扩增的小型实验猪第二代软骨细胞结合,以纤维蛋白凝胶为支架材料,利用其可注射性回植于实验猪自体腹壁外侧皮下,8周后取财进行大体及组织学检测,并与不含微粒脱细胞软骨基质实验组相比较.结果:培养出的组织工程化软骨组织细胞生长良好,具有分泌软骨基质功能,含微粒脱细胞软骨基质实验组表现出更佳的生物学性能.结论:将异体微粒软骨脱细胞基质与纤维蛋白凝胶结合,可以作为良好的可注射性复合支架材料应用于组织工程化软骨的构建.
