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心肌桥壁冠状动脉内皮细胞超微结构及血流动力学变化
背景:国内外已有较多研究从组织学角度观察心肌桥对心肌血流灌注和动脉硬化的影响,但较少见有关心肌桥作用下壁冠状动脉及其近段、远段血管内皮细胞的超微结构特征的研究.目的:观察心肌桥壁冠状动脉及其近段内皮细胞超微结构特征以及心肌桥导致的血流动力学变化.方法:用肝素-生理盐水和4%戊二醛溶液常规处理10例心肌桥冠脉搭桥术患者切除的左冠状动脉,取壁冠状动脉近段、壁冠状动脉段、壁冠状动脉远段,扫描电镜观察其血管内皮细胞和基膜特征.结果与结论:10例标本心肌桥存在位于前降支中段和近段行程中,长度为2.4～3.6 mm.壁冠状动脉近段内皮细胞多呈卵圆形,长轴和血流方向一致,细胞表面可见到许多"虫啄样"缺损.壁冠状动脉段内皮细胞细长,呈梭形,长轴和血流方向一致,细胞较少脱落,2例标本在内皮细胞表面见到微绒毛,并可见有特殊的桥样结构,该结构常始于细胞的一端,在管腔内游离一段后再与相邻的细胞形成连接.壁冠状动脉远段内皮细胞形态较不规则,表面有少量"虫啄样"破坏,边缘境界清楚,很少脱落.壁冠状动脉段内皮细胞与近段、远段内皮细胞相比,面积基本相同,但周长明显增加,形态指数显著较低(P<0.05).提示壁冠状动脉内皮细胞受到心肌桥压迫导致血流切变力增高产生适应性反应,对内皮细胞有保护作用,而其近段内皮细胞由于切变力较低容易被损伤,成为动脉粥样硬化发生的基础.
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超选左前降支微血栓微球混悬液分次灌注构建小型猪急性心肌梗死后缺血性心力衰竭组织工程学模型
背景:既往心力衰竭模型制作方法主要通过开胸结扎不同部位冠状动脉建立急性心肌梗死模型,该方法创伤大、开胸手术复杂,动物死亡率高、术后恢复较慢.目的:应用选择性冠状动脉前降支微血栓微球混悬液灌注方法造成心肌缺血坏死,探索建立稳定存活的小型猪急性心肌梗死后心力衰竭动物模型.方法:对小型猪行冠状动脉造影监测心电图及应用漂浮导管监测有创血流动力学参数,并行pigtail导管测量左室舒张末压的变化,以4F导管超选左前降支行微血栓微球混悬液分次注入,心肌梗死溶栓实验心肌灌注分级<2级和左室舒张末压力>15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)时停止注射,间隔10 min重复注射,待左室舒张末压稳定在15～18 mm Hg后结扎血管,并加压包扎.监测心肌坏死标志物心肌肌钙蛋白I和肌酸激酶同工酶变化.造模后1,7,14,30 d行心脏超声检查,造模30 d复查有创血流动力学检查,并行心脏病理检查,认定和评价模型的成功率、稳定性和可重复性.结果与结论:造模30 d后共有14头小型猪成活,心电图、心肌坏死标记物、病理检查均符合急性心肌梗死病生理过程.其中13头小型猪达到动物模型标准,肺毛细血管楔压明显升高(P<0.01),心输出量和左室射血分数明显降低(P<0.01),模型成功率为76.47%;病理检查显示心肌梗死面积占左心室面积的(33.85±4.43)%.微血栓微球混悬液灌注构建小型猪急性心肌梗死后心力衰竭模型更接近急性心肌梗死-心力衰竭临床病理生理学特点.
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胶原三维立体培养模型中胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞的相互作用
背景:组织细胞、炎细胞可能在肿瘤细胞的侵袭、转移中发挥着重要作用,而细胞间的相互作用对基质金属蛋白酶有影响.目的:观察胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞在胶原三维立体培养条件下,相互作用对基质金属蛋白酶1,2,9表达的影响.方法:采用三维胶原立体培养模型,按比例混合胶原,4倍DMEM和灭菌水,1倍DMEM的液体胶原,其中胶原终浓度为0 75 g/mL.将GLC-82细胞、胚肺成纤维细胞分别单独培养及GLC-82细胞和胚肺成纤维细胞按5:1混合培养,待胶原固化后加入1倍DMEM培养基,48 h后收集上清液.Western blot法检测基质金属蛋白酶1表达水平,明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶2,9的表达.结果与结论:胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞混合培养组基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶2,9分泌量大于单独培养组(P<0 05).结果提示,三维立体培养条件下,胚肺成纤维细胞与肺癌GLC-82细胞相互作用能通过上调基质金属蛋白酶1,2,9的表达和活化,促进肺癌侵袭和转移.
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构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型
背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺发育和肺功能调节中起重要作用,它与肺纤维化和肺癌等疾病的发生发展有密切联系,为了对这些疾病进行体外实验研究,必须对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定以建立一个稳定高效的细胞模型.目的:建立一套可靠的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、原代培养与鉴定的方法,为肺纤维化及肺癌等疾病的进一步研究奠定基础.方法:①用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,分离小鼠肺组织细胞成分.取出小鼠肺组织,剪成小块,加入胰蛋白酶,移出细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM中止消化;同法用胰蛋白酶再消化1次,中止消化后加入Ⅰ型胶原酶,再中止消化.②经差速离心差速贴壁和免疫黏附法纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行原代培养.将肺细胞悬液接种入包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出未黏附细胞,去上清,重悬沉淀,将细胞接种于培养皿和培养板中培养.倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞产量、纯度及活力,免疫细胞化学染色鉴定肺泡表面活性蛋白A和肺泡表面活性蛋白C的表达,透射电镜鉴定肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性细胞结构.结果与结论:用此方法,每只小鼠获得肺泡Ⅱ型上皮细胞(4.8±1.2)×10~6,纯度达到(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%,倒置显微镜下原代肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或立方形,细胞质内有大量反差明显的细小颗粒,细胞为岛状生长方式;免疫细胞化学鉴定,肺泡表面活性蛋白A呈棕黄色,肺泡表面活性蛋白C呈绿色,均定位表达于细胞浆;透射电镜见特征性板层小体和细胞游离面大量微绒毛.证实利用胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化的方法可获得高产量高纯度的AEC Ⅱ,能满足一般的体外实验要求.
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秋冬季节对健康大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6表达的影响
背景:近年来研究证实,季节气候的变化和肺表面活性物质蛋白A及白细胞介素6在肺脏免疫防御功能调节方面均起到很重要的作用,但是季节气候产生影响的机制目前还不清楚.目的:观察秋冬季大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6的表达,认识季节和气候变化影响大鼠肺脏非特异性免疫的作用机制,为呼吸系统季节性发病的病理生理机制的认识提供实验依据.方法:分别于立秋、秋分、立冬、冬至节气前14 d购入雄性SD实验大鼠,并分为相应组别.自由摄取水及正常饲料和室温饲养,接受自然光照.到相应节气,于当日下午6时将动物断头处死,取出全肺组织作表面活性蛋白AmRNA和白细胞介素6 mRNA检测.结果与结论:与立秋、秋分、冬至组大鼠相比,立冬大鼠肺组织表面活性蛋白A和白细胞介素6均表达量较低,提示肺部免疫防御功能存在秋季高冬季低的季节节律,而表面活性蛋白A和白细胞介素6正是免疫防疫功能的物质基础.
关键词： 秋冬季节 肺组织 肺表面活性物质相关蛋白A 白细胞介素6 心肺组织工程 -
慢性肺动脉栓塞实验动物模型构建的技术进展
目的:综述国内外关于慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolism pulmonary hypertension,CTEPH)实验动物模型构建技术的研究概况.方法:应用计算机检索PubMed数据库2006/2009相关文章,检索词为"model of pulmonary thromboembolism".同时计算机检索中国期刊全文数据库2003/2009相关文章,检索词为"肺动脉栓塞,实验".此外还手工查阅相关专著数部.纳入标准:①文章所述内容应与CTEPH实验研究相关,包括慢性血栓栓塞性肺动脉高压流行病学,不同实验动物及不同制备方式.②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:①重复研究.②Meta分析.结果与结论:目前用于CTEPH模型制备的实验动物主要有犬、猪和鼠等.很多研究者都尝试模仿深静脉血栓形成后,多次急性肺栓塞事件所导致的CTEPH形成机制,建立CTEPH验动物模型.建立犬CTEPH模型主要有反复自体血凝块注入法及陶瓷念珠输入法,可用于CTEPH病理生理特点、数字剪影检查、解剖研究以及肺动脉内膜剥脱手术和介入治疗等干预治疗血栓栓塞性肺动脉高压的研究与影像学诊断技术的研究.建立猪CTEPH模型主要采用体外注入栓子法,可用于影像技术诊断CTEPH研究.建立鼠CTEPH模型主要采用反复自体血凝块注入法与肺动脉结扎法,可用于CTEPH病理生理及诊断方面研究.目前对CTEPH的研究主要是使用犬、猪和鼠实验动物模型,各有优缺点,在具体的实验研究中需根据实验目的和设计选择适当的实验动物及制作方法,以便取得佳的实验结果.
关键词： 慢性血栓栓塞性肺动脉高压 模型 实验动物 心肺组织工程 综述文献
