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小鼠脂肪来源基质细胞向成骨细胞的分化
目的 研究小鼠脂肪来源基质细胞的分离培养、鉴定及向成骨方向分化的潜能.方法 取小鼠睾丸脂肪垫用胶原酶消化后获得血管基质层(SVFs),进行体外培养.取第4代细胞用流式细胞技术检测细胞表面分子CD29、CD44、Sca-1,用碱性磷酸酶染色及矿化结节染色法鉴定分化的成骨细胞.结果 小鼠脂肪来源基质细胞高表达CD29、CD44,双阳性达84.9%,但Sea-1成阴性表达.经诱导的成骨细胞碱性磷酸酶染色胞质成黑色,矿化结节-茜素红与von Kossa染色成红褐色与黑色.结论 小鼠脂肪来源基质细胞为一种理想的成体干细胞.可用于基础实验研究,且能成功分化为成骨细胞.
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脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究
目的 建立人脂肪来源的基质细胞(ADSCs)的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能.方法 采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定.结果 每100 ml脂肪抽吸物中可分离得到2 ×107～4×107个有核细胞,60 d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞.结论 建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能.有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗.
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原代脂肪基质细胞增殖前后细胞表面标志变化的研究
目的 研究抽吸术采集的脂肪颗粒经消化清洗贴壁生长的人脂肪基质细胞增殖前后的形态和表面抗原表达的变化.方法 吸脂术获得脂肪组织,经胶原酶消化分离、接种培养皿,贴壁后采集的细胞和原代细胞增殖80%融合后采集的细胞,分别通过流式细胞仪检测CD105、CD166、Stro-1、CD29等表面标志的变化.结果 CD29在原代细胞增殖前后无明显变化,保持极高的阳性率;Stro-1在原代细胞增殖前后无明显变化,保持较低的阳性率;CD105、CD166阳性率显著增加.结论 脂肪基质细胞原代培养增殖前检测细胞表面标志可以更加准确地反映提取的脂肪基质细胞的原始情况,经过原代培养增殖后部分干细胞相关的抗原的比例发生了明显的变化.
