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bFGF通过上调ERK表达诱导BMSCs向神经胶质样细胞分化
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞增殖与分化的作用及其可能机制.方法 从SD大鼠骨髓中获得BMSCs,纯化培养传代后用不同浓度的bFGF诱导,经MTT法检测bFGF对BMSCs生长的影响,应用透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化,免疫细胞化学染色显示GFAP表达,Western blot方法分析p-ERK蛋白表达.结果 bFGF对BMSCs具有促增殖作用,在倒置光显微镜和透射电镜下可见到有神经胶质样细胞形成,免疫细胞化学证明GFAP的表达较对照组显著增高(P＜0.01),Western blot证明bFGF上调ERK蛋白表达(P＜0.05).结论 bFGF可活化Ras/ERK信号转导通路,促进BMSCs细胞增殖分化为GFAP阳性的神经胶质样细胞.
关键词： 骨髓间充质干细胞 神经胶质样细胞 碱性成纤维细胞生长因子 p-ERK SD大鼠 -
间充质祖细胞源性的神经元样细胞肌内移植后自身特性的维持
目的 探讨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)源性的神经元样细胞肌内移植后能否维持其自身特性.方法 取3周龄健康GFP转基因C57小鼠后肢长骨进行MPC培养及鉴定,选取生长良好的第3代MPC,采用神经元原代培养上清液进行神经元样细胞诱导分化后收集细胞,并制备成5×105/μL细胞悬液备用.选取12周龄健康C57小鼠24只,按随机数字表法分为损伤+移植细胞组、损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组.损伤+移植细胞组及假手术+移植细胞组:将制备的5 μL MPC悬液散点注入小鼠三头肌内；损伤+生理盐水组和假手术+生理盐水组:同法注入等量生理盐水.术后4周取材,荧光显微镜下观察肌内移植细胞存活情况,电镜观察肌肉超微结构的变化,免疫荧光染色检测神经元特异性标志物NSE、NeuN及神经胶质特异性标志物GFAP的表达情况.结果 肌内移植细胞生长良好且均匀分布于肌细胞间隙,并抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生.损伤+移植细胞组定植存活的移植细胞阳性表达:NSE(58.35±1.37)％、NeuN(60.22 ±0.16)％及GFAP(13.32±1.65)％,损伤+生理盐水组、假手术+移植细胞组、假手术+生理盐水组均无阳性细胞表达.结论 MPC具有良好的生物学活性,经体外诱导分化为神经元及神经胶质样细胞后移植于失神经支配肌内可定植存活,并能够维持神经元及神经胶质样细胞的特性,同时有效抑制了肌细胞核、线粒体、内质网的退变及肌肉纤维化的发生.
