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非小细胞肺癌中Axin基因启动子区异常高甲基化与临床病理因素的关系
目的 体轴抑制因子(Axin)是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,其基因启动子区存在CpG岛,本研究的目的是探讨非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区是否存在异常高甲基化,以及高甲基化对Axin转录水平的影响,及其与肺癌患者临床病理因素的关系.方法 应用巢式甲基化特异性PCR(Nested MSP)对98例肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin基因启动子区的甲基化状态进行了检测,同时应用RT-PCR方法检测了肺癌组织及其配对癌旁正常肺组织中Axin mRNA的水平,并且通过卡方检验统计Axin基因启动子区高甲基化状态与肺癌患者临床病理因素的关系.结果 部分非小细胞肺癌组织中Axin基因启动子区处于高甲基化状态(42/98),而其配对的癌旁正常肺组织中Axin基因处于半甲基化或非甲基化状态(56/98),高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平明显低于其配对癌旁正常肺组织及非高甲基化的肺癌组织中Axin mRNA的水平;Axin基因启动子区异常高甲基化与非小细胞肺癌患者的分化程度负向关,与TNM分期及淋巴结转移正相关.结论 非小细胞肺癌中Axin基因启动子区高甲基化与Axin的转录水平和非小细胞肺癌的分化程度负相关,与TNM分期及淋巴结转移正相关.
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Axin抑制肺腺癌SPC-A-1细胞系侵袭的作用和可能机制
目的 Wnt通路的异常激活与恶性肿瘤的发生和进展关系密切,我们在前期研究中发现肺癌中也有Wnt通路异常激活的现象,而体轴抑制因子Axin是Wnt通路的抑制因子,本研究的目的是探讨Axin对肺癌细胞侵袭力的影响及其机制.方法 构建野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变),转染人肺腺癌SPC-A-1(SPC)细胞,应用GSK-3 β siRNA阻断β-catenin的降解,Western bolt检测各处理组细胞中β-catenin和MMP-7的变化,Transwell检测各处理组细胞侵袭能力的变化.结果 转染野生型Axin明显的下调β-catenin和MMP-7的蛋白表达以及SPC细胞的侵袭力(P＜0.01),而GSK-3β siRNA可以阻断Axin的这种功能,转染突变型Axin不能有效的下调β-catenin和SPC细胞的侵袭能力.结论 Axin抑制SPC细胞的侵袭力,可能与其下调β-catenin,负向调控Wnt通路有关,Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点.
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Axin抑制A549细胞迁移能力及其机制的研究
目的:Wnt信号传导通路的异常激活在肿瘤发生和发展中起着重要的作用,而Axin可以通过参与形成降解复合体下调β-catenin负向调控Wnt通路,抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为.本次实验的目的是研究Axin对肺癌细胞迁移能力的影响及可能的途径.方法:在已有野生型Axin质粒的基础上构建了突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变,用AxinΔβ-ca表示),并向A549细胞中转染野生型Axin 和突变型Axin.Western blot法检测转染后Axin和β-catenin的表达.用各转染组细胞进行划痕实验和Transwell细胞迁移实验.结果:转染野生型Axin可以明显的下调A549中β-catenin的表达(P＜0.01),抑制A549细胞的迁移能力(P＜0.01),而转染突变型Axin和空质粒后A549细胞中β-catenin没有明显的变化,细胞的迁移能力未受到明显的影响.结论:体轴抑制因子Axin可以明显的抑制肺癌细胞的迁移能力.而这种作用可能与其负向调控Wnt通路有关.Axin可能成为临床治疗肺癌的新靶点.
