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生物防护服穿透性噬菌体指标筛选
目的 研究PhiX-174、f2、MS23种噬菌体的生物学性质,为生物防护服抗微生物悬浮液穿透性能评价选择合适的指示噬菌体.方法 从噬菌体形态大小、繁殖能力、耐压性及其所形成噬菌斑的特征等方面,对PhiX-174、f2、MS23种噬菌体的生物学性质进行观察.结果 PhiX-174形成噬菌斑大、形成时间短,培养5h后,噬菌斑直径可达2.57 mm,繁殖能力强,4h即可迅速增殖到1.67×1010 PFU/mL,终可达1012 PFU/mL以上,3种噬菌体大小相当,直径均为25 nm左右,远小于人类血源性病毒和呼吸道病毒,均有一定耐压力,在1.75、3.5、7、14、20 kPa下作用5 min后,均未见噬菌体滴度明显减少.结论 噬菌体PhiX-174适于作为生物防护服尤其高危生物污染环境作业人员防护服抗病毒效果评价的指示病毒.
关键词： 指示噬菌体 噬菌体PhiX-174 噬菌体f2 噬菌体MS2 生物防护服 -
实时荧光RT-PCR与普通RT-PCR检测噬菌体MS2的差异
目的:通过比较实时荧光-步RT-PCR和普通的两步法RT-PCR在检测噬菌体MS2时灵敏度和特异性的差异,以期在消毒学、微生物等相关试验中选择灵敏度和特异性能满足所需的-种方法检测噬菌体或类似病毒.方法:采用实时荧光-步RT-PCR法和普通的两步法RT-PCR对噬菌体MS2复制酶基因和衣壳蛋白基因进行检测,比较两种方法对两个基因片段的检测灵敏度和特异性.结果:对于复制酶基因,实时荧光RT-PCR的灵敏度达0.25 pg/山,普通的两步法RT-PCR为2500 pg/μl;而对于衣壳蛋白基因,前者灵敏度达0.025 pg/μl,后者为250 pg/μl.在所用的10种菌(毒)株的特异性检测中,实时荧光-步RT-PCR法只检测到噬菌体f2和大肠杆菌ATCCl5597(MS2的宿主菌)有与噬菌体MS2复制酶基因和衣壳蛋白基因均相应的两种荧光信号,而其它菌(毒)株为阴性结果;两步法RT-PCR电泳图谱只显示出噬菌体f2有-条与噬菌体MS2衣壳蛋白基因相当的条带以及大肠杆菌ATCCl5597有-条与MS2复制酶基因大小相当的条带,其它菌(毒)株的电泳图谱无相关条带.结论:对于噬菌体MS2的检测,实时荧光-步RT-PCR法的灵敏度比普通的两步法RT-PCR高104倍,但特异性后者略强于前者.
关键词： 实时荧光-步RT-PCR 两步法RT-PCR 噬菌体MS2 灵敏度 特异性 -
纳米二氧化钛对噬菌体MS2灭活效果的初步观察
[目的]在实验条件下观察纳米二氧化钛对噬菌体MS2的灭活效果,以初步判断噬菌体MS2对纳米二氧化钛的抵抗力.[方法]消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活实验,中和剂鉴定实验,噬菌体的检测采用双层琼脂法.[结果]①紫外光激发组,800 mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用5 min或者200 mg/L,纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用10 min就能达到消毒水平.②自然光激发组,1 000mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用5 min或者200 mg/L纳米二氧化钛对噬菌体MS2作用20 min就能达到消毒水平.[结论]在紫外光激发和自然光激发下,纳米二氧化钛均能在短时间内灭活噬菌体MS2达到消毒水平,提高的纳米二氧化钛作用浓度可以增强对噬菌体MS2的灭活效果.噬菌体MS2对纳米二氧化钛的抵抗力不强.
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MS2噬菌体宿主范围及其相关特性的初步研究
[目的]为探索MS2噬菌体的宿主菌范围及在不同的宿主菌内的生长情况等,为流行病学研究、细菌的噬菌体分类鉴定和其他相关研究提供基本数据和资料. [方法]采用双层琼脂法测定大肠埃希菌MS2噬菌体对各试验菌株的裂解情况,观察其噬菌斑生长情况并计数. [结果]①大肠埃希菌MS2噬菌体与埃希大肠杆菌(ATCC 15597)、大肠杆菌285和大肠杆菌B分别进行双层琼脂平板培养,结果均出现大小均一、边缘整齐、透明清晰的噬菌斑;②相同稀释度的MS2噬菌体与埃希大肠杆菌(ATCC 15597)、大肠杆菌285和大肠杆菌B培养产生的噬菌斑数量依次递减:③MS2噬菌体与其余6种所选试验菌株分别进行双层琼脂平板培养,结果琼脂表面均出现浑浊,未产生噬菌斑. [结论]在本次试验所选的8种试验菌中,通过双层琼脂法测定适合做大肠埃希菌MS2噬菌体宿主菌者有埃希大肠杆菌(ATCC 15597)、大肠杆菌285和大肠杆菌B;所选其余6种试验菌株均不适合做MS2噬菌体的宿主菌.
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有机干扰物影响纳米Ag液灭活噬菌体MS2效果的实验研究
[目的]通过有机干扰物牛血清白蛋白(BSA)的存在与否比较研究纳米Ag液对噬菌体MS2的不同灭活效果,为纳米Ag在生活及环境中的实际应用提供基础资料. [方法]采用悬液定量灭活试验测定纳米Ag液对噬菌体MS2的灭活对数值(LIV). [结果]在不加有机干扰物BSA时,100 mg/L纳米Ag液作用60 min,对噬菌体MS2的灭活对数值LIV为4.01log10,400 mg/L作用20 min,其LIV达4.12log10;而加入3%的BSA后,400 mg/L纳米Ag液作用1 440 min(24 h),对噬菌体MS2的LIV为3.61log10,800 mg/L作用90 min,其LIV为4.02log10. [结论]环境中有机干扰物的存在将会极大程度地降低纳米Ag液对噬菌体MS2的灭活效果.
