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H2株甲肝减毒活疫苗安全性及免疫效果观察
目的观察单层及悬浮吸附工艺不同收毒时间生产的H2株甲型肝炎减毒活疫苗(以下简称甲肝活疫苗)接种恒河猴的安全性及免疫效果.方法筛选甲肝抗体阴性,丙氨酸转胺酶(ALT)正常的恒河猴15只,随机分为3组,每组5只,下肢静脉注射疫苗1ml/只.接种3 d内,每天观察有无局部和全身反应,0,2,3,4,6,8周采血测ALT及甲肝抗体,0,4,8周肝穿做组织病理检查,观察到期尸检.结果接种疫苗3 d内,所有恒河猴均无局部和全身反应.观察全程ALT正常,肝脏无特殊组织病理改变.免后4周甲肝抗体全部阳转,单层工艺26 d疫苗、悬浮工艺23和26 d疫苗几何平均滴度(GMT)4周分别为9.2,14.9和27.9;8周分别为32,64和64;悬浮工艺23 d和26 d疫苗猴体免疫效果相似,且两者均明显优于单层工艺疫苗.结论悬浮吸附工艺23 d收毒疫苗接种恒河猴具有较好的安全性和可靠的免疫效果,采用悬浮吸附工艺生产H2株甲肝活疫苗23 d收获病毒较经济和稳妥.
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3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖特性比较
目的 比较3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖动力学特性.方法 分别用悬浮吸附法、静止吸附法和非吸附法培养脊髓灰质炎病毒(Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型),分别在间隔12 h时取样,至细胞完全病变或96 h,用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒一步生长曲线.结果 悬浮吸附法病毒增殖快,2:1分种率时,60 h细胞完全病变,滴度高,分别为Sabin Ⅰ型9.000 LgCCID50/ml、SabinⅡ型8.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型8.750 LgCCID50/ml;1:1分种率时,Sabin Ⅰ型在60 h完全病变,滴度为8.875 LgCCID50/ml,SabinⅡ型和中Ⅲ2型在70 h完全病变,滴度分别为8.000 LgCCID50/ml和8.125 LgCCID50/ml;静止吸附法1与静止吸附法2差异不明显,96 h时,仍有约10%～20%细胞未发生病变,静止吸附法1滴度为Sabin Ⅰ型7.125 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml,静止吸附法2滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.875 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型7.000 LgCCID50/ml;非吸附培养法,在96 h,有20%细胞未发生病变或病变程度较轻.滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型5.625 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml.在12 h,悬浮吸附法(分种率2:1)培养三型病毒滴度已分别达到6.000、6.125和6.250 LgCCID50/ml,略高于悬浮吸附法(分种率1:1)达到的值,而静止吸附法及非吸附法培养至36 h,病毒滴度才达到相近的水平.结论 在3种培养方法中,悬浮吸附法明显优于静止吸附法和非吸附法.
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悬浮吸附法在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒
目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性.方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度.结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,Sabin Ⅰ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50.与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P＞0.05).结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产.
