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肿瘤特异启动子文献资料
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靶向性Fas基因转导卵巢癌细胞系SKOV3的实验研究
目的 为了解决Fas基因转导中靶向性差的问题,在基因上游插入人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子,构建真核表达质粒,了解其对Fas表达的提高程度. 方法 将Fas基因自质粒pcDNA3/Fas中用限制性内切酶KpnⅠ和XbaⅠ切出,插入到KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后的载体pAd/TERT中hTERT启动子的下游,构建pAd/TERT-Fas,并进行酶切鉴定和测序鉴定.然后转染pAd/TERT-Fas、pAd/TERT和pcDNA3/Fas到低表达Fas的SKOV3,并命名为T-F、T和F.对转染克隆细胞进行逆转录PCR、实时PCR、Western免疫印迹和流式细胞分析,了解Fas基因在mRNA和蛋白水平的表达情况. 结果 质粒pAd/TERT-Fas经酶切及测序鉴定构建成功.转染SKOV3鉴定结果 如下:实时聚合酶链反应中T-F的循环阈值(cycle threshold,CT)值为29,F的CT值为31.4,T和未转染SKOV3不表达Fas;Western免疫印迹结果 显示在F和T-F组Fas蛋白有表达,T-F组表达明显强于F组;流式细胞分析Fas在未转染SKOV3、T、F、T-F组分别为1.1%,4.9%,10.9%,15.1%. 结论 本研究成功构建真核表达质粒pAd/TERT-Fas,并转染SKOV3,结果 显示hTERT启动子可提高Fas表达.
