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可诱导共刺激因子在类风湿关节炎外周血和关节滑液细胞的表达
目的 探讨可诱导共刺激因子(ICOS)在类风湿关节炎(RA)外周血和关节滑液的表达和作用.方法 选择RA患者45例,年龄18～71岁,平均(48±16)岁,病程0.5～17年,平均(6±7)年,男性9例,女性36例(80%).取新鲜抗凝外周血单个核细胞(PBMC)行ICOS、CD45RO和CD45RA在CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的双色和或三色表达百分比.其中15例同时行关节液单个核细胞(SFMC)进行相同的检查.与RA患者年龄和性别匹配的正常体检者56名作为对照.结果 ①CD4+ICOS+/CD4+在RA的PBMC较正常对照组明显下降(P=0.0175),在RA的SFMC非常显著升高(与RA的PBMC比较,P=0.0020);②CD8+ICOS+/CD8+在RA患者的PBMC较正常对照组明显下降(P=0.0193),在RA的SFMC升高但差异无统计学意义(与PBMC比较,P=0.0933);③CD45RO+ICOS+/CD4+在RA的SFMC较PBMC显著升高(P=0.0330),CD45RO+ICOS+/CD8+在SFMC较PBMC也明显升高(P=0.0588),可能扩大例数后能达到有统计学意义的显著升高;④B淋巴细胞上的CD19+ICSOL+/CD19+在RA的PBMC升高(与对照相比差异无统计学意义),而在SFMC则降低(与PBMC相比,P=0.0123).⑤将RA患者按病情分为活动与非活动,非活动性RA外周血细胞CD19B细胞表达的ICOSL(ICOS配体)百分比较活动性RA非常显著地升高(P=0.0016).其他各组T细胞表达的ICOS没有显著性变化.结论 RA活化的T淋巴细胞主要集中于关节液中,故无论是CD4+,还是CD8+细胞,表达ICOS及其与CD45RO记忆细胞三色表达均较血液有非常显著地升高,而且是非常敏感的指标.而关节液B淋巴细胞表面的ICOSL较血液中下降,尤其是活动组较非活动组非常显著地下降.说明RA关节局部发生了由ICOS介导的免疫反应,并可能参与了关节的破坏活动.
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针对大鼠ICOS基因的shRNA表达质粒的构建与鉴定
目的 构建针对大鼠可诱导共刺激因子(inducible co-stimulater,ICOS)基因的特异性RNA干扰质粒,并进行鉴定.方法 采用U6启动子,分别把被9bp序列间隔的19bp长短的ICOS靶序列的反向重复序列,连接到线性化处理的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒中,分别构建ICOS短发夹环RNA(ShRNA),产生重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS.结果 将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,并作测序分析,经测序鉴定确定为所需序列.结论 针对大鼠ICOS基因的特异性RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS的成功构建,为进一步研究阻断ICOS表达对实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis,EAU)的影响奠定基础.
关键词： 可诱导共刺激因子 RNA干扰 实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎 基因测序 -
RNA干扰体外抑制大鼠ICOS基因的表达
目的 观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点.方法 设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定.应用Lipofectamine 2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况.结果 成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA 1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应为明显.在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论 重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位.RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段.
关键词： 可诱导共刺激因子 RNA干扰 实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎 转染 鼠 -
人结直肠癌组织中B7和ICOS分子mRNA的表达
目的:通过原位检测B7-1,B7H1,B7H2和ICOS等分子mRNA在结直肠癌细胞及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中的表达,以期探讨肿瘤微环境中Th2型细胞因子表达上调的可能机制.方法:采用原位杂交技术,用地高辛标记的寡核苷酸探针检测了22例人结直肠癌组织B7-1,B7H1,B7H2和ICOS分子mRNA表达状况,并结合临床特点加以综合分析.结果:肿瘤组织和肿瘤浸润淋巴细胞除表达B7-1外,均可见B7H1,B7H2 和ICOS mRNA表达,但肿瘤细胞的表达水平显著高于TIL的表达水平,具有显著性差异(P<0.05);B7家族分子在癌细胞和TIL中的表达均与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、有无区域淋巴结转移无关,在TIL中B7H1表达与肿瘤浸润深度有关(P<0.05);在癌细胞中则与之无关(P=0.155);在癌细胞和TIL中B7H1和ICOS分子表达与远处转移之间具有显著性差异(P均<0.01).结论:肿瘤细胞和TIL表达B7H1,B7H2和ICOS分子可能与肿瘤微环境中Th2型细胞因子占优势有关.
