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(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯对类风湿关节炎的免疫调节机制研究
目的 ①研究(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对类风湿关节炎(RA)患者外周血和滑液中T细胞增殖的影响及对RA相关细胞因子的免疫调节作用.②观察EGCG对RA滑膜成纤维细胞(FLS)增殖的影响.方法 ①取RA患者外周血(30份)、滑液(23份)分离单个核细胞,并分设空白对照组,阴性对照组,甲氨蝶呤阳性对照组,EGCG低、中、高剂量组,通过同位素(3H)掺入法,在体外研究EGCG对RA患者外周血及滑液中T细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测EGCG对RA外周血及滑液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素-γ、白细胞介素(IL)-1、IL-6和IL-17A的影响.②取RA患者滑膜组织(8例)进行原代培养,并分设空白对照组,甲氨蝶呤组(阳性对照),EGCG低、中、高剂量组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在体外研究EGCG对RA患者FLS增殖的影响.统计学处理采用方差分析和SNK-q检验.结果 ①RA患者外周血及滑液中EGCG高剂量组每分钟脉冲数(cpm)值[分别是(15 136±2910),(11587±3135)],较阴性对照组(42 856±2127)(35 748±4512)下降,差异均有统计学意义(P均＜0.01);外周血中ECCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(321±13)、(298±20)、(132±12)、(197±7)、(59±8)pg/ml],均较阴性对照组[(458±28)、(505±26)、(346±28)、(405±25)、(109±13)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);滑液中EGCG高剂量组TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A吸光度值分别是[(41.4±2.9)、(182±16)、(56.3±11.0)、(34.2±1.9)、(44±8)pg/ml],均较阴性对照组[(388.3±19.3)、(469±20)、(104.2±17.8)、(114.5±4.8)、(104±11)pg/ml]下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).②EGCG高剂量组FLS吸光度值(0.080±0.017),较空白对照组(0.274±0.041)下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EGCG可体外抑制RA患者外周血和滑液中T细胞增殖,抑制TNF-α、干扰素-γ、IL-1、IL-6和IL-17A分泌;可体外抑制RA FLS增殖.
关键词： 关节炎 类风湿 细胞因子 (-)-表没食子儿茶素没食子酸酯 -
(一)一表没食子儿茶素没食子酸酯对胶原诱导性关节炎小鼠免疫调节机制研究
目的 采用鸡Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠模型,观察(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的治疗作用,并探讨其作用机制.方法 给予CIA小鼠EGCG治疗,以磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照,观察各组小鼠发病情况.通过对CIA小鼠关节评分和关节病灶病理学检测[苏木素-伊红(HE)染色] 判断EGCG的疗效;通过,3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入实验、流式细胞术及Western-blot方法阐明EGCG的免疫学作用机制.结果 ①EGCG能够改善CIA的关节评分、减少病变关节组织炎性细胞浸润;② EGCG能抑制CIA小鼠C Ⅱ反应性脾细胞的增殖[EGCG组每分钟脉冲数(cpm)值3366±199;PBS组cpm值5342+112,P<0.05]和细胞因子白细胞介素(IL)-17的分泌(EGCG组IL-17阳性细胞数占CD4+T细胞0.41%;PBS组占4.05%);③EGCG能提高CIA小鼠淋巴结细胞中IKB的表达,降低磷酸化IKB蛋白水平的表达.结论 EGCG能显著减轻CIA严重程度.EGCG通过抑制CIA小鼠C Ⅱ反应性脾细胞的增殖和炎症因子IL-17的分泌;以及通过抑制CⅡ反应性淋巴结细胞中IKB的磷酸化,增强IKB的表达从而抑制核因子(NF)-κB的活性来治疗CIA.
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EGCG与Andro对胶原诱导的关节炎的联合治疗作用
采用Ⅱ型胶原诱导小鼠关节炎(collagen induced arthritis, CIA)模型,观察(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯 [(-)-epigallocatechin-3-gallate, EGCG]与穿心莲内酯(andrographolide,Andro)联合治疗作用并初步探讨其作用机制.研究发现EGCG和Andro联合用药能显著减轻疾病严重程度.体内、体外实验证实联合用药在基因水平及蛋白水平上协同抑制炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的产生;另外,EGCG和Andro联合用药也可明显降低血清中抗Ⅱ型胶原抗体含量.结果表明,EGCG和Andro联合治疗CIA具有明显的疗效,为研发治疗RA的药物提供一条思路.
