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基于Biacore T200分析系统研究阿达木单抗生物学活性

马春梅;黄晓星;曹忠莲;郑斌;孟立正;刘莉

摘要: 目的 利用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究阿达木单抗的生物学活性.方法 将人源阿达木单抗偶联于CM5传感芯片,利用Biacore T200系统观察重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)和食蟹猴TNF-α与阿达木单抗结合的动力学常数,并采用不同种属的重组TNF-α验证种属特异性,进一步研究阿达木单抗抑制重组TNF-α的细胞毒作用,以确认阿达木单抗的生物活性.结果 阿达木单抗与重组人TNF-α的结合常数(Ka)为(2.114±0.007)×105,解离常数(Kd)为(5.315±0.220)×l0-5,亲和力常数(KD)为(2.515±0.107)×10-10;与重组食蟹猴TNF-α的Ka为(2.574±0.068)×105,Kd为(1.554±0.124)×10-5,KD为(5.320±1.271)×10-10.阿达木单抗与50 nmol/L重组人TNF-α、重组食蟹猴TNF-α、重组小鼠TNF-α和重组大鼠TNF-α结合的响应值分别为84.3、66.4、1 3和-0.8 RU,呈现明显的种属差异.阿达木单抗可抑制重组人TNF-α和重组食蟹猴TNF-α对L929细胞的毒性作用,其半数有效浓度分别为194.0和685.5 pmol/L,但对重组小鼠或重组大鼠TNF-α导致的细胞毒作用无影响,细胞水平检测结果与Biacore T200系统检测结果一致.结论 用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究抗原抗体结合简便快速准确,该方法适合用于重组人TNF-α单抗生物学活性分析与药效学评价.

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