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人羧肽酶A1活性中心基因的克隆及原核表达

岳乔红;于文彬;郝晓柯;别良峰;程晓东;苏明权;杨柳

摘要: 目的: 克隆人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1, CPA1)活性中心基因,构建重组表达载体并对其进行诱导表达. 方法: 通过RT-PCR方法扩增出正常胰腺组织中CPA1活性中心基因,克隆入载体pGEM-T easy,测序分析. 将该目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达重组蛋白. 结果: 获得了人CPA1活性中心基因,构建了重组表达质粒,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,在Mr约46 000处出现一条新生蛋白带,经凝胶薄层扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的22.1%. 结论: 成功克隆人CPA1活性中心基因并得到了其原核表达产物,为获得分子量小而具有相似活性的蛋白奠定了基础.

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