酮MC-EUSE表面涂抹法

　　(1)原理:MC-ELISE表面涂抹法是将酶标抗体的高度特异性和斑点ELISA的精细灵敏度相结合，再利用微菌落生长的快速性将标本定量均匀涂布于醋纤膜上，既克服了国标法越时、耗力、耗财的缺点，又清除了样品抽滤或点样后的边缘效应，整个试验只需8-18h。酮(2)生物试剂:鼠抗大肠菌群混合血清(该血清与大炀菌群混合菌液的凝集效价为1酮:酮10240.40)、肠道致病性大肠埃希民菌诊断血清(0111卫生部成都生物制品所)；HRP-羊抗鼠IgG，酮DAB粉剂(Sigma公司产品)酮；DAB(3酮-3'-二氨基联苯胶)酮底物即用型、链霉菌抗生素蛋白-过氧化酶试剂盒(SP酮-Kit，MAXIM酮BIOTECH酮INC，酮U.酮S.的。(3)材料:醋酸纤维膜(浙江黄岩曙光化工厂)；苯盼乙醇透明液(苯酣:95%乙醇=酮1:9)；缓冲液(pH酮7.4，0.酮2MPBS)酮；DAB(3酮-3酮-二氨基联苯胶)底物液，将DAB预备好后置低温冰箱。临用前取出用PBS酮1:10稀释，加入30%H20215ml。

　　LTSE快速法检测大肠菌群

　　1990年，涂楚国研究了一种新的大肠菌群快速检验方酮法，即LTSE(Lactose酮-酮Tryptone酮-酮SodiumDodecyl酮sulfate酮-Trace酮Elements)法。该法快速简易，结果准确，应用广泛，酮效益明显，总大肠菌群和粪大肠菌群在15-18H内同时检出，费用比三步多管发酵法(GB)节省75%酮-84%酮。此方法于1999年被列入行业标准WS/T116酮-酮199列食品卫生微生物学检验:大局菌群LTSE快速检验方法，快速法经过卫生监测检撞单位实验证明，结果与国家标准法基本一致。其制备酮方法如下:乳糖5g、腕蛋白陈20g、十二烷基磺酸钠、(SDS)O.5g、氯化钠、磷酸氢二钾14.48g、磷酸二氢2g、蒸馏水1000ml，加热溶解，调节pH7.0，冷却后加入微量元素O.5ml(硫酸侯挝、氯化钻挝、氯化铁O.5g、加蒸馆水100ml溶解)分装到带小倒管的试管中，各10ml，115℃高温灭菌20min，双料管除蒸馆水外，其它成分加倍。试剂有革兰氏酮染色液、氧化酶试剂(1%对氨基二甲苯二胶单盐酸溶液，新鲜配制)、Kovace氏吲哚试剂。

　　发酵盒法梭验食品只大局菌群

　　(1)基本原理:为了简化操作，减少实验器材和改进实验器材质量，王新为等设计了一种简便的发酵盒代替9支玻璃试管。在发醇培养液中加入适量琼脂形成胶体状的软琼脂代替玻璃小倒管，观察发酵过程中的产气现象。(2)发酵盒的基本结构和设计原理:发酵盒由透明聚碳酸醋塑料模压制而成。可经受高压蒸汽灭菌或煮沸消毒。尺寸为79mm酮x酮36mm酮x酮56mm，分为盒盖与盒体两部分。盒内分成酮20ml酮x3，2ml酮x3，O.酮2ml酮x酮3三种不同容量共9个格池，格酮池之间由42mm高的小格板隔开，沿盒体外周高度34mm处划一条刻度线，作为各池发酵培养液加量标志。这样集9管为一体。食品检样含量与GB法相同，其检测结果阳性酮管数基本一致。(3)发酵盒法适用结果与评价。该法与GB法检测结果无显著性差异，并具有以下优点:①发酵盒酮法方法先进、操作简便快速、结果准确可靠。②发酵盒设计新颖、整体结果强、坚固耐用、体积小、便于携带和野外条件下快速展开工作。③具有较大的实用价值，为基层开展食品卫生监督和检验提供了便利条件和装备。

　　特别技术法检测水中大肠菌群

　　有谷氨酸-脱竣酶、电化学法、放射性检测法等。这些方法快速，但灵敏度较差。除放射性测定法可检测出水样含菌104酮_106/ml时方可检出，其特异性也较差。更主要的是这些方法需特殊的仪器设备及药品，在短期内尚不能适合国内实验室应用。量实验法的原理是根据堂试(盏细胞溶解物)可与微量内毒素发生作用。形成凝胶的原理来检测内毒素的方法。而内毒素主要存在于革兰民阴性细菌中，故可用来检测水中的大肠菌群。方法是将水样作倍比序列稀释，分别取稀释水样0.1时，混匀，置于37℃水浴中山，取出静置5min。后观察结果，如出现凝胶则为阳性。同时将标准内毒素也倍比序列稀释作对照，测定堂试剂的灵敏度，求出水样的内毒素含量。Jorgensen等曾将此法与常规细菌学检验法进行对比，井水和湖水中内毒素含量与革兰民阴性细菌数量呈正相关，相关系数有显著性差异。加氯消毒的自来水和再置废水中内毒素量与相应细菌指标呈负相关，其原因是由于水中细菌在氯的作用大量被裂解的内毒素淤离于水中所载。盆试验法操作简便，2h内可完成，且不需要特殊仪器设备，但特异性差，因此只能用于边远地区水源调查、野营、野外考察及特殊灾害情况下的应急需要。