姜黄素抑制食管癌KYSE70细胞上皮-间质转化

目的:探讨姜黄素对转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)诱导的食管癌KYSE70细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响.方法:不同浓度姜黄素处理KYSE70细胞12、24、48和72 h后,应用CCK-8法检测细胞的增殖情况.应用姜黄素(20 μmog1/L)、TGF-β1 (10ng/mL)和姜黄素(20 μmol/L)联合TGF-β1 (10 ng/mL)处理KYSE70细胞后,在光学显微镜下观察细胞的形态,Transwell小室法检测各组细胞的侵袭能力,FCM法检测各组细胞的细胞周期分布,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测各组细胞中EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin) mRNA及蛋白的表达.结果:不同浓度姜黄素作用不同时间均能抑制食管癌KYSE70细胞的增殖(P值均＜ 0.01).TGF-β1处理后,食管癌KYSE70细胞形态向间质细胞转变,呈长梭形,但这种转变可以被姜黄素抑制.TGF-β1处理组细胞中G0/G1期细胞所占百分比低于对照组(KYSE70细胞未进行任何处理)(P=0.021);姜黄素联合TGF-β1处理组细胞中S期细胞所占百分比高于TGF-β1处理组(P＜0.001),而G2/M期细胞所占百分比低于TGF-β1处理组(P＜0.001).TGF-β1处理组的细胞侵袭数多于对照组(P＜0.001),姜黄素处理组的细胞侵袭数少于对照组(P＜0.001),姜黄素联合TGF-β1处理组的细胞侵袭数少于TGF-β1处理组(P＜0.001).TGF-β1处理组细胞中E-cadherin mRNA (P=0.045)和蛋白(P=0.008)的表达水平均低于对照组,而N-cadherin和vimentin mRNA (P=0.003和P＜0.001)及蛋白(P值均＜ 0.001)的表达水平均高于对照组;姜黄素联合TGF-β1处理组细胞中E-cadherin mRNA (P=0.005)和蛋白(P=0.006)的表达水平均高于TGF-β1处理组,而N-cadherin和vimentin mRNA(P=0.010和P＜ 0.001)及蛋白(P值均＜0.001)的表达水平均低于TGF-β1处理组.结论:姜黄素可抑制食管癌KYSE70细胞的增殖和侵袭,还可有效抑制EMT的发生.

沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响

目的:研究沉默上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亚型转换的影响.方法:构建靶向ESRP1基因的ESRP1-shRNA慢病毒表达载体(pLVTHM/ESRP1-shRNA1和pLVTHM/ESRP1-shRNA2), 同时设置阴性对照(negative control,NC)质粒(pLVTHM/NC-shRNA);将3种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒.慢病毒感染卵巢癌OVCAR5细胞后,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ESRP1 mRNA及蛋白的表达水平;采用限制性内切酶AvaⅠ和HinC Ⅱ检测沉默ESRP1基因后对FGFR2亚型转换的影响;MTT法检测沉默ESRP1基因后对OVCAR5细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)及β-链蛋白(β-catenin)表达的变化.结果:成功构建靶向ESRP1基因的shRNA慢病毒表达载体并包装获得慢病毒;与阴性对照组比较,靶向ESRP1基因的shRNA能明显抑制OVCAR5细胞中ESRP1 mRNA及蛋白的表达(P值均＜0.05);沉默ESRP1基因的表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2由上皮亚型(FGFR2b)向间质亚型(FGFR2c)的转换,并促进OVCAR5细胞的增殖(P＜0.05);同时,下调E-cadherin的表达水平而上调N-cadherin的表达水平,并激活β-catenin (P值均＜0.05).结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路.

黏液瘤病毒对卵巢癌细胞增殖的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨黏液瘤病毒(myxomavirus,MV)感染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其分子机制.方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,给予MV感染处理;同时,以灭活病毒处理作为阴性对照组,以RPMI 1640培养液处理作为空白对照组.采用CCK-8法检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Bcl-2和survivin的mRNA水平,FCM法分析各组细胞周期分布,蛋白质印迹法检测各组细胞中细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)、磷酸化ERK1/2、磷酸化Akt、Bcl-2和survivin的蛋白表达水平,并采用比色法测定caspase-3和caspase-8的活性.结果:与阴性对照组和空白对照组相比,MV能够明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖和细胞周期进程(P值均＜0.05).MV作用SKOV3细胞96 h后,抗凋亡蛋白Bcl-2和survivin的mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P值均＜ 0.05),增殖相关信号通路中ERK1/2和Akt的磷酸化水平均明显降低(P值均＜ 0.05),而caspase-3和caspase-8的活性均明显升高(P值均＜ 0.05).结论:MV能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期,下调抗凋亡蛋白Bcl-2和survivin的表达,提高caspase-3和caspase-8的活性,并抑制增殖相关信号通路中ERK1/2和Akt的磷酸化有关.

早期宫颈癌患者手术前血浆D-二聚体水平影响术后复发

目的:探讨手术前血浆D-二聚体(D-dimer,D-D)水平对早期宫颈癌患者手术后复发的影响.方法:这是个前瞻性研究.对2009年1月1日—2012年12月31日在温州市人民医院进行宫颈癌根治术的165患者进行随访,以宫颈癌复发为终点事件.根据手术前血浆D-D水平分为D-D≥0.50 mg/L组(67例,40.6％)和D-D＜0.50 mg/L组(98例,59.4％),Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,分析影响宫颈癌复发的危险因素.结果:D-D＜0.50 mg/L组有11例患者复发,中位复发时间为36个月,5年无复发生存率为88.8％ (87/98);D-D≥0.50 mg/L组有16例患者复发,中位复发时间为25.5个月,5年无复发生存率为76.1％(51/67).D-D≥0.50mg/L组患者的无复发生存率显著低于＜0.50 mg/L组(P=0.028).淋巴结转移、宫颈癌国际妇产科联盟(International Federation of Gynecologyand Obstetrics,FIGO)分期、血浆D-D水平和治疗方法是影响宫颈癌复发的独立危险因素(P值均＜0.05).结论:手术前血浆D-D水平是影响宫颈癌复发的危险因素.

预防性使用粒细胞集落刺激因子对乳腺癌辅助化疗所致中性粒细胞减少的影响

目的:比较聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(pegylated recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,PEG-rhG-CSF) 和重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)防治EC方案(表柔比星联合环磷酰胺)辅助化疗乳腺癌患者中性粒细胞减少的疗效和安全性.方法:选择2013年10月—2015年3月接受EC方案辅助化疗的乳腺癌患者135例,分为预防组(54例)和非预防组(81例);预防组又分为PEG-rhG-CSF组(19例)和rhG-CSF组(35例).PEG-rhG-CSF组化疗结束后48 h给予PEG-rhG-CSF 3.0 mg皮下注射1次;rhG-CSF组化疗结束后48 h给予rh-G-CSF 5 μg·kg-1·d-1皮下注射1次,连续注射3～5 d.结果:预防组与非预防组的3或4度中性粒细胞减少发生率和中性粒细胞减少性发热发生率的差异均有统计学意义(P值均＜0.05).PEG-rhG-CSF组与rhG-CSF组的3或4度中性粒细胞减少发生率差异有统计学意义(P＜0.05).PEG-rhG-CSF组与rhG-CSF组的中性粒细胞减少性发热、骨关节疼痛、乏力、发热和注射部位疼痛发生率的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论:接受EC方案辅助化疗的乳腺癌患者应预防性使用粒细胞集落刺激因子类药物.PEG-rhG-CSF可有效预防中性粒细胞减少,值得在临床上进行推广和应用.

拉帕替尼治疗HER2阳性转移性乳腺癌的疗效和安全性

目的:评价口服拉帕替尼治疗人表皮生长因子受体2 (human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2)阳性转移性乳腺癌的疗效和安全性.方法:回顾性分析40例接受以口服拉帕替尼为基础的治疗方案的HER2阳性转移性乳腺癌患者的临床病历资料和随访资料.结果:40例HER2阳性转移性乳腺癌患者中,36例(90.0％)在复发/转移阶段曾接受过曲妥珠单抗治疗,中位治疗时间为12.0个月(95％可信区间:10.5～13.5个月)(范围:2.0～54.0个月);2例(5.0％)在辅助治疗阶段接受曲妥珠单抗治疗,且术后无病生存期≤2年;2例(5.0％)未曾接受过曲妥珠单抗治疗,但首次远处转移部位为脑.40例患者中,拉帕替尼联合化疗31例(77.5％),联合内分泌治疗6例(15.0％),联合曲妥珠单抗治疗3例(7.5％).40例患者均可评价疗效,无完全缓解者,部分缓解10例(25.0％),疾病稳定21例(52.5％),疾病进展9例(22.5％);客观缓解率(完全缓解十部分缓解)为25.0％,临床获益率[(完全缓解十部分缓解十疾病稳定)≥6个月]为50.0％.40例患者的中位无进展生存期为6.0个月(95％可信区间:4.6～7.5个月)(范围:1.0～20.0个月).拉帕替尼相关主要不良反应为1～2级腹泻8例(20.0％),1～2级皮疹6例(15.0％).结论:拉帕替尼能够有效治疗曾接受过曲妥珠单抗治疗的HER2阳性转移性乳腺癌患者.

三阴性乳腺癌中PTEN基因启动子甲基化的临床意义

目的:检测三阴性乳腺癌组织中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)启动子区的甲基化情况,并分析其与患者临床病理特征的相关性.方法:选取60例三阴性乳腺癌组织标本和16例正常乳腺组织标本(作为对照组),采用焦磷酸测序法检测各组织中PTEN基因启动子区的甲基化率,并采用免疫组织化学法测定Ki-67、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、p53和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白的表达,然后统计分析PTEN基因甲基化率与三阴性乳腺癌患者不同临床及病理学特征之间的关系.结果:三阴性乳腺癌组织中PTEN基因启动子区甲基化率明显高于正常乳腺组织(P＜0.05).三阴性乳腺癌患者中,临床Ⅲ期的PTEN基因启动子区甲基化率明显高于0～Ⅱ期(P＜0.01),有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P＜0.01),VEGF和p53蛋白中高表达组高于不表达和低表达组(P值均＜ 0.01),Ki-67≥14％组高于Ki-67＜14％组(P＜0.01).结论:PTEN基因启动子区甲基化可能与三阴性乳腺癌的临床分期、淋巴结转移以及VEGF、p53和Ki-67表达水平具有相关性,提示其可能在三阴性乳腺癌的发生和发展中起重要作用.

一种新型血清外泌体分离方法的构建及其在乳腺癌微RNA检测中的应用

目的:构建一种采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)富集血清中外泌体并进行分离的方法.方法:分别采用PEG8000、商品化EXOQuick试剂盒以及超速离心法富集血清外泌体.采用透射电子显微镜和NanoSight NS90法对分离得到的外泌体的粒径进行检测.蛋白质印迹法比较3种方法获得的血清外泌体表面标志物CD9表达的丰度;实时荧光定量PCR法检测乳腺癌、乳腺良性病变及健康志愿者血清和血清外泌体中微RNA-21(microRNA-21,miR-21)的表达趋势.结果:本研究构建获得的PEG分离外泌体的方法,在粒径分布和外泌体表面标志物CD9表达丰度方面,优于超速离心法,与商品化的EXOQuick试剂盒效果相当.PEG法富集获得的乳腺癌患者血清外泌体中miR-21的表达水平较乳腺良性病变明显上调(P=0.024),上调倍数为2.68倍;而直接从血清中检测miR-21在乳腺疾病患者血清中表达水平的结果显示,乳腺癌患者和乳腺良性病变患者基本没有变化(P=0.373)).结论:本研究构建的外泌体富集试剂及其方法,操作简便、耗时短、成本低.与直接检测血清中miRNA的表达水平相比,可明显增加检测效率.

乳腺癌组织中CAP1的表达及其临床意义

目的:探讨环化酶相关蛋白1 (cyclase-associated protein 1,CAP1)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:收集93例乳腺癌组织及其相应的癌旁组织,应用免疫组织化学法检测CAP1和增殖抗原Ki-67在乳腺癌组织及其相应癌旁组织中的表达,分析CAP1与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系以及对乳腺癌患者预后的影响.结果:乳腺癌组织中CAP1和Ki-67的表达水平均高于其相应的癌旁组织(P值均＜ 0.01).CAP1和Ki-67高表达与乳腺癌组织的分化程度(P＜0.001和P=0.001)、腋窝淋巴结转移(P=0.011和P=0.007)和雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达(P=0.031和P=0.026)有关,但与患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达、人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)表达和p53表达无关(P值均＞0.05);乳腺癌组织中CAP1表达与Ki-67表达呈正相关(r2=0.403,P=0.002).组织分化程度、腋窝淋巴结状态、CAP1表达和Ki-67表达是乳腺癌患者预后的独立影响因素(P值均＜ 0.05).结论:乳腺癌组织中CAP1高表达,可能在乳腺癌细胞增殖中发挥重要作用.

雄激素受体在Her-2过表达型乳腺癌中的表达及其预后意义

目的:探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)在人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,Her-2)过表达型乳腺癌中的表达情况及其预后意义.方法:选取102例Her-2过表达型乳腺癌患者作为观察组,并取同期40例三阴性乳腺癌患者作为对照组.采用免疫组织化学法检测2组肿瘤组织中AR的表达情况,并分析观察组中AR表达与患者临床病理特征及预后的相关性.结果:观察组的AR阳性率明显高于对照组(75.5％ vs 32.5％,P＜0.05).观察组中AR阳性者与AR阴性者相比具有较低的淋巴结转移率及Ki-67值(P值均＜ 0.05).单因素分析结果显示,AR阳性的Her-2过表达型乳腺癌患者的5年无疾病生存(disease-free survival,DFS)率明显低于AR阴性者(71.7％ vs 89.8％,P＜0.05).多因素分析结果显示,肿瘤大小和淋巴结转移是影响Her-2过表达型乳腺癌患者5年DFS时间和总生存(overallsurvival,OS)时间的独立预后因素(P值均＜0.05);AR与Her-2过表达型乳腺癌患者的5年DFS具有相关性(x2=5.736,P=0.017).结论:Her-2过表达型乳腺癌中AR阳性患者的预后较差,提示AR可能成为治疗这类乳腺癌的新靶点.

胃肠恶性肿瘤免疫治疗的研究进展

免疫检查点抑制剂应用作为一种新型的抗肿瘤疗法,是恶性肿瘤治疗史上一个里程碑式的创新.研究发现,抑制免疫检查点对胃肠肿瘤的治疗也十分有效.为了提高免疫治疗的疗效,一些不同的治疗方案正在研究评估中.本文总结了2014年欧洲癌症研究与治疗组织(European Organization for Research and Treatment of Cancer,EORTC) 召开的胃肠道肿瘤转化研究会议和近两年美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)年会的相关讨论内容,并从免疫细胞浸润与新分子靶点、免疫检查点抑制剂、免疫治疗遗传标志、免疫检查点抑制剂与溶瘤病毒组合以及个体化免疫治疗这5个方面对胃肠肿瘤免疫治疗的新研究进展进行综述.

DNA甲基化在肺癌与环境暴露间关联的研究进展

肺癌是目前全世界常见且发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤之一.在肿瘤的发生和发展过程中,遗传学内因和外界环境因素均发挥着重要的作用.吸烟和环境污染暴露因素(如多环芳烃、颗粒物和职业污染暴露)等都是肺癌发生的危险因素.在肺癌与环境暴露因素的风险评估研究过程中,表观遗传学机制(如DNA甲基化)的重要作用得以凸显.某些特定基因的DNA甲基化异常是肺癌发生过程中的一个早期事件.本文对吸烟、多环芳烃和颗粒物等环境暴露因素所诱发的DNA异常甲基化与肺癌之间的关联研究进行综述.通过深入了解和研究这些基因的DNA甲基化在肺癌与环境暴露因素之间的关联作用,进一步阐明肺癌的发生和发展机制.环境因素诱发的DNA异常甲基化有望成为肺癌早期诊断或预防的一个潜在标志物.

游离核酸在肿瘤液体活检中的应用及临床意义

随着分子生物学技术的不断发展,以检测游离核酸作为无创分子诊断标志物的液体活检技术得以实现,且日益受到关注.与传统分子诊断技术相比,液体活检技术主要以游离核酸为检测对象,具有更全面地反映肿瘤特性、克服肿瘤异质性难题以及可以非侵入性多次取样等优点,既可以减轻患者痛苦,也提高了对肿瘤特性及其负荷评估的准确性.游离核酸无创分子标志物的研究在肿瘤早期诊断、治疗监测和预后评价等方面具有重要的临床意义.本文对游离核酸作为肿瘤液体活检标志物的临床意义及其初步应用的研究进展进行综述.

电压门控性钠通道与肿瘤的研究进展

电压门控性钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)是一种由核心α亚基和辅助β亚基组成的异聚蛋白复合体,广泛表达于各种肿瘤细胞和组织中;α亚基具有调节肿瘤细胞侵袭的功能,而β亚基与肿瘤细胞的黏附迁移有关,且不同类型肿瘤中β亚基的功能也有所差异.越来越多的研究报道显示,VGSCs对肿瘤的侵袭和转移具有一定的影响,并提出了基于肿瘤诊断和靶向治疗的策略.因此,本文就VGSCs亚基与肿瘤的侵袭和迁移以及其作为肿瘤治疗靶点的研究进展作一概述.

The concern of iron-replacement therapy on hepatocellular carcinoma in a patient with mild anemia