增殖性腺病毒CNHK600-p53的构建及对胰腺癌细胞抑制的体外实验研究

目的 探讨携带p53基因的新型增殖性腺病毒CNHK600-p53的导入能否增加胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察化疗药物5-FU、丝裂霉素(MMC) 和表阿霉素(epirubicin, EPI)单独应用及与CNHK600-p53联合应用对胰腺癌细胞株PANC1的杀伤效应.结果 PANC1在5-FU浓度为400 μg/ml时细胞抑制率为(65±4.2)%,MMC浓度为1 μg/ml时细胞抑制率为(41±1.9)%,EPI浓度为10 μg/ml时细胞抑制率为(65±1.8)%.转入CNHK600-p53(MOI = 0.625)后再使用上述浓度的化疗药物,PANC1的细胞抑制率分别为(89±5.3)%、(60±2.3)%和(75±1.5)%.当MOI值为0.3125、0.625、1.25时,CNHK600-p53组和Ad-p53组的细胞抑制率分别为(27±2.5)%、(30±3.7)%、(61±4.3)%和(4±2.7)%、(5±3.5)%、(16±4.5)%.结论 单用CNHK600-p53效果优于Ad-p53,携带p53基因的CNHK600-p53能提高胰腺癌细胞株PANC1对化疗药物的敏感性.

腹腔灌洗引流在重症急性胰腺炎非手术治疗中的作用——附104例随机对照研究

目的 探讨腹腔灌洗引流在SAP非手术治疗中的作用.方法 104例SAP患者随机分为腹腔灌注组(n = 45)和腹腔未灌注组(n = 59),腹腔未灌注组给予常规胃肠减压、抑酶等非手术治疗,腹腔灌注组在常规治疗基础上加腹腔灌洗引流.观察两组疗效、并发症发生率以及平均住院天数,按Balthazar CT分级标准和Ranson标准评分.结果 两组治愈率和好转率比较无显著差异(P＞0.05),但腹腔未灌注组病死率(15.3%)显著高于腹腔灌注组(P＜0.01).死因多数由于严重并发症,如感染并发ARDS、MODS和DIC等.两组治愈病例的CT分级和Ranson分值无显著性差异,但两组好转病例CT分级均显著高于治愈病例(P＜0.01).两组治愈或好转病例治疗后的Ranson分值均显著低于入院时(P＜0.01).腹腔灌注组弥漫性腹膜炎、低血容量性休克、急性肾衰、Ⅱ型呼衰、ARDS和MODS的并发症发生率显著低于腹腔未灌注组(P＜0.01或P＜0.05).腹腔灌注组治愈和好转病例平均住院天数为(21.7±10.1)d和(30.3±19.9)d,显著短于腹腔未灌注组的(35.3±16.2)d和(41.1±22.6)d(P＜0.01).结论 腹腔灌洗引流术是一种安全有效的SAP辅助治疗方法,在非手术治疗基础上行腹腔灌注的疗效明显优于单纯非手术治疗,可以减少严重并发症的发生率,降低病死率.

专用肠内营养制剂对急性坏死性胰腺炎大鼠蛋白质代谢的影响

目的 观察专用肠内营养制剂(EN-S)对ANP大鼠蛋白质代谢的调节作用.方法 应用3.8%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射制备32只ANP模型大鼠,分为对照组、EN-S 组、EN组和PN 组4组,各8只.营养各组于造模后12 h分别给予EN-S、EN和PN制剂.检测各组制模后12 h、24 h、48 h的血淀粉酶,观察胰腺组织的病理改变,以及第7天大鼠体重、血浆氨基酸谱和血清白蛋白含量.结果 制模后第7天,EN-S组大鼠体重、血清白蛋白、血浆天门冬氨酸(Asp)、蛋氨酸(Met)和赖氨酸(Lys)显著高于普通EN组(P＜0.05).EN-S组与PN组的体重、血清白蛋白、氨基酸谱整体构成无显著性差异.结论 EN-S制剂能够改善ANP大鼠的蛋白质代谢,有助于整体情况的改善.

ERCP在不明原因复发性急性胰腺炎诊治中的作用

目的 探讨ERCP在不明原因复发性急性胰腺炎(RAP)诊治中的作用.方法 收集15例不明原因RAP患者.其中男5例,女10例,年龄25 ～ 65岁,中位年龄38岁,病程1 ～ 2年,发病次数2 ～ 5次.10例在急性发作期,5例在发作间期行ERCP诊治.结果 15例患者经ERCP明确病因者6例(3例胆管微结石,1例胆总管末端小囊肿,1例胰管小结石,1例胰管蛋白栓子),可疑病因者6例(乳头旁憩室2例,十二指肠乳头炎4例),未明确病因者3例.根据ERCP检查结果,9例行乳头括约肌切开术(EST),6例行胰管括约肌切开术.术后随访2年,15例患者均未复发胰腺炎.ERCP和EST术后2例出现一过性高淀粉酶血症,无其他并发症.结论 ERCP对不明原因RAP有明确病因和指导治疗的作用.

微生态肠内营养治疗重症急性胰腺炎肠黏膜损伤的临床研究

目的 观察微生态肠内营养对SAP肠黏膜损伤治疗和菌群紊乱的调节作用.方法 40例SAP患者随机分为对照组和治疗组.对照组给予常规肠内营养,治疗组加用微生态制剂,治疗7 d,检测患者血浆二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸水平以及肠道菌群变化.结果 治疗7 d后,治疗组血浆DAO水平为(4.35±0.91)U/ml,较对照组的(5.45±2.19)U/ml明显下降(P＜0.05);D-乳酸为(10.41±5.36)mg/L,与治疗前无显著性差异,但明显高于对照组的(5.53±2.05)mg/L(P＜0.05);治疗组患者肠道双歧杆菌、乳杆菌的总数达(5.98±1.63)In/g和(7.23±1.94)In/g,较治疗前的(3.76±1.67)In/g和(3.91±1.82)In/g明显增加(P＜0.05),肠道菌群比例接近正常,而对照组仍存在一定程度的菌群紊乱.结论 微生态肠内营养具有减轻SAP肠黏膜损伤、调节肠道菌群微生态平衡、保护肠屏障功能的辅助治疗作用.

胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达

目的 分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况.方法 应用RT-PCR检测Oct-4 mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Western blot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素 (FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率.结果 4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白.88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关.Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%.结论 Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞.

早期微创腹腔置管灌洗治疗重症急性胰腺炎

目的 探讨早期微创腹腔置管灌洗治疗SAP的临床疗效.方法 采用微创的方法,在床边对16例SAP患者采用腹腔置管灌洗,同时给予生长抑素、抑酸、抗感染、保持水电解质及酸碱平衡、营养支持等综合治疗,检测腹腔灌洗前后腹水淀粉酶及APACHEⅡ评分.结果 16例患者经过腹腔灌洗后病情均有不同程度的好转,腹水淀粉酶从灌注前的(1957.6±87.8)U/L降至灌注48 h后(201.5±19.8)U/L,APACHEⅡ分值从灌注前的12.63±2.68降至灌注48 h 后的4.95±1.18.结论 早期微创腹腔置管灌洗简单易行、操作时间短、创伤小、疗效佳,是治疗SAP行之有效的方法之一.

人胰腺癌不同转移潜能细胞株的分离筛选和鉴定

目的 获得不同转移潜能的胰腺癌细胞株.方法 通过有限稀释法获得人胰腺癌细胞系AsPC-1中不同的单细胞克隆细胞瘤,经过侵袭实验初筛后选择转移潜能不同的2株亚细胞株N1的N7,利用细胞生长曲线测定、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测、裸鼠种植癌转移状态来分析它们的生物学性质.结果 N7体外生长速度明显快于N1;N7软琼脂克隆形成率为109±13,明显高于N1的26±5(P＜0.05);N7的G2/M比率为26.3±1.9,明显高于N1的8.3±1.3(P＜0.01);N7裸鼠体内种植癌肝转移率为100%,明显高于N1的0.结论 从同一亲本筛选出转移潜能高低的2个亚细胞系,N7为高转移潜能亚细胞系,N1为低转移潜能亚细胞系.

腺病毒介导CD/UPRT自杀基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨CD/UPRT自杀基因系统在胰腺癌基因治疗中的作用.方法 采用同源重组技术构建重组腺病毒Ad-CD、Ad-CD/UPRT和Ad-GFP;体外感染人胰腺癌SW1990细胞,RT-PCR检测UPRT mRNA表达;MTT法检测细胞对5-FC的敏感性及旁观者效应;流式细胞仪分析细胞凋亡率;建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体内直接注射腺病毒,观察CD/UPRT自杀基因的原位治疗作用.结果 转染CD/UPRT的胰腺癌SW1990细胞对5-FC的敏感性明显提高,Ad-CD/UPRT组的IC50为25 μmol/L,而Ad-CD组和Ad-GFP组分别为100 μmol/L和＞1 000 μmol/L.Ad-CD组、Ad-CD/UPRT组和Ad-GFP组的细胞凋亡率分别为61.3%、40.5%和3.0%,3组比较有显著差异(P＜0.05).CD/UPRT基因转染存在旁观者效应.Ad-CD/UPRT瘤内注射治疗后种植癌体积缩小81%,Ad-GFP治疗肿瘤缩小63%.结论 CD/UPRT自杀基因系统能提高对胰腺癌细胞的杀伤作用.

Cajal间质细胞和肠神经元在急性坏死性胰腺炎豚鼠小肠组织中的改变

目的 探讨Cajal间质细胞(ICC)和肠胶质神经元数量在ANP豚鼠小肠组织中的改变及对肠动力的影响.方法 24只豚鼠随机分为对照组、ANP 24 h组和48 h组,各8只.采用腹腔注射20%L-精氨酸制作ANP模型.器官浸浴技术评价离体小肠的运动.HE染色观察胰腺和小肠组织病理改变.应用免疫荧光法检测ICC标志物酪氨酸激酶(C-KIT)和肠神经胶质细胞标志物的蛋白基因产物9.5 (PGP9.5).结果 ANP 24 h和48 h组胰腺组织呈明显水肿、坏死,小肠黏膜腺体结构紊乱,炎症细胞浸润.小肠运动的频率分别为(10.25±1.56)次/min和(10.37±1.41)次/min,运动振幅分别为(159.65±24.30)g*s和(156.64±17.01)g*s,较对照组明显下降;肌间丛ICC量从对照组的(0.273±0.03)%降至ANP组(0.104±0.04)%和(0.129±0.05)%,而肠神经元数量无明显变化.结论 ANP豚鼠模型存在小肠动力功能的障碍,肠肌间丛Cajal间质细胞数量的减少可能是小肠动力功能抑制的重要因素.

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植胰腺存活的影响

目的 探讨共刺激阻断剂PD-L1Ig与雷帕霉素(rapamycin, RPM) 联合应用对大鼠移植胰腺存活的影响.方法 以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,各40只.Lewis大鼠先注射链脲佐菌素制备成糖尿病模型,随后建立原位胰腺移植模型.随机分为移植组、PD-L1Ig治疗组(PD-L1Ig组)、RPM治疗组(RPM组)和PD-L1Ig + RPM 组(联合组),观察各组术后血糖和移植胰腺病理改变、移植胰腺存活时间.移植后第7天各组处死2只大鼠,取受体与供体脾细胞做混合淋巴细胞反应(MLR).结果 移植后第1天血糖恢复正常,第7天移植组血糖较各治疗组明显升高(P＜0.01),各治疗组中以联合组降糖效果显著.PD-L1Ig组、RPM组的移植胰腺平均存活时间分别为(9.1±1.3)d和(12.5±1.2)d,较移植组的存活时间(5.2±0.7)d明显延长(P＜0.01);联合组的存活时间则长达(23.9±1.8)d,与其他各组差异显著(P＜0.01).移植后7 d, PD-L1Ig 组、RPM组移植胰腺有较多淋巴细胞浸润, 联合组移植胰腺淋巴细胞浸润很少.结论 PD-L1Ig与RPM联合应用可有效抑制细胞免疫应答, 干预排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间.

骨形成蛋白-7在慢性胰腺炎中的表达及意义

目的 研究骨形成蛋白-7(BMP-7)在大鼠CP组织中的表达,探讨其在胰腺纤维化形成中的意义.方法 每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate, DDC)建立大鼠CP模型.HE染色观察正常组及造模后2、4、6、8周时大鼠胰腺病理学变化,VG染色观察胶原纤维含量,免疫组化检测BMP-7、TGF-β1、Smad2/3的表达.结果 (1)正常组BMP-7在腺泡细胞的胞质中表达.造模后4周腺泡细胞及部分炎性细胞BMP-7阳性面积比及阳性灰度值较正常组减少(P＜0.05).造模后8周腺体萎缩几乎无BMP-7表达,残留腺泡中表达量较正常胰腺显著减少[阳性面积比:(5.63±1.65)% vs (36.51±3.76)%, P＜0.01;灰度值:144.20±5.67 vs 174.54±1.22, P＜0.01].(2)TGF-β1和Smad2/3的表达在纤维化进展中变化一致.对照组小叶间结缔组织和部分腺泡间有少量表达.8周时小叶内纤维化区域及残留腺泡细胞间可见大量TGF-β1和Smad2/3表达,TGF-β1为(22.66±6.73)%;Smad2/3为(24.58±4.35)%,较正常组增加(P＜0.01).(3)TGF-β1与Smad2/3表达呈正相关(r = 0.61, P = 0.005), BMP-7与TGF-β1、Smad2/3表达均呈负相关(r值分别为-0.69和-0.68,P = 0.001).结论 胰腺纤维化过程中TGF-β1/Smad2/3信号通路活化,可促进细胞外基质沉积和腺泡细胞萎缩.BMP-7的表达量可反映残存腺泡细胞的数量,可能对CP的进展具有潜在的保护作用.

125I粒子组织间植入治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨125I粒子组织间植入治疗胰腺癌的有效性.方法 Balb/c裸鼠腋下接种人胰腺癌SW1990细胞.按植入剂量不同将成瘤后裸鼠分为对照组和50 Gy、100 Gy、150 Gy、200 Gy组,每4 d测量肿瘤体积,21 d后处死裸鼠,称瘤重,计算肿瘤抑制率,常规病理检查,TUNEL法检测凋亡细胞.结果 对照组、50 Gy组、100 Gy组、150 Gy组及200 Gy组抑瘤率分别为0、(42.8±16.2)%、(55.1±22.3)%、(72.8±12.8)%及(75.6±8.6)%;以粒子为中心的肿瘤坏死面积分别为(6.3±2.1)%、(20.8±3.2)%、(36.3±3.1)%、(64.1±2.8)% 及(82.6±3.8)%;相对凋亡指数分别为1、2.07±0.57、2.75±0.33、4.64±0.45及7.04±0.34,各治疗组均显著高于对照组(P＜0.05).结论 125I粒子组织间植入可显著抑制肿瘤生长,放射粒子具有直接杀死肿瘤细胞和诱导凋亡双重作用.

内镜下抽线式金属支架取出胰管结石——附3例报告

目的 设计抽线式胰管金属支架,以利于取出胰管结石.方法 收集3例确诊胰管结石并胰管远端狭窄,且ERCP取石失败者,应用十二指肠镜在主胰管置入抽线式金属支架,24 ～ 48 h后再次ERCP取石.结果 3例患者主胰管结石直径1 ～ 1.5 cm,造影显示胰管远端狭窄.先置入抽线式胰管金属支架,24 ～ 48 h后金属支架完全膨胀,插入气囊顺利取出全部结石,再将金属支架抽成丝样经活检孔取出.术后无出血、嵌顿、胰腺炎等并发症发生.结论 内镜下胰管内置入抽线式金属支架取石,安全、有效,费用低廉,增加了胰管取石的成功率.

干细胞相关基因Oct-4在人肿瘤细胞系中的表达及其意义

目的 探讨干细胞相关基因Oct-4在多种人肿瘤细胞系中的表达.方法 体外培养人胰腺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞系,应用RT-PCR和Western blot法分别检测Oct-4 mRNA和蛋白在各种人肿瘤细胞系中的表达.结果 Oct-4 mRNA和蛋白在胰腺癌细胞系SW1990、PANC1、BxPC3、PC3,宫颈癌细胞系HELA,肝癌细胞系HepG2,乳腺癌细胞系MCF-7和结肠癌细胞系CaCo2中均有表达.结论 干细胞相关基因Oct-4在肿瘤细胞中的表达,一方面说明恶性肿瘤与干细胞具有密切的关系,另一方面也说明Oct-4基因在这些肿瘤的发生中起到重要作用.

奥宁治疗重症急性胰腺炎疗效的观察

SAP是临床上常见的消化系统急性重症,临床经过凶险,严重者伴有休克、呼吸衰竭及肾脏衰竭,病死率高达15% ～ 30%[1,2].近10余年来,由于生长抑素类似药物奥曲肽的临床应用,使SAP的治疗有了很大进展[3].

重组腺病毒介导的野生型PUMA基因对胰腺癌细胞的放射增敏作用

文献报道[1,2],PUMA基因转染可促进体外肺癌和食管癌细胞凋亡,并能增强它们对放化疗的敏感性.我们曾将野生型PUMA转染胰腺癌Aspc-1细胞,发现Aspc-1细胞的生长明显被抑制[3].本实验旨在研究转染野生型PUMA基因的胰腺癌Aspc-1细胞是否增强其对放疗的敏感性.

胰腺囊腺肿瘤引起孤立性胃底静脉曲张二例报告

例1 患者女,44岁.因上腹部不适3月伴呕血、黑便6 h入院.患者近3月来无明显诱因出现上腹部不适,呈间歇性,与进食无明显关系,时有上腹部灼热,嗳气.今感上腹部不适、恶心,呕吐咖啡色胃内容物2次,伴头晕、出冷汗,随后解柏油便2次即来院就诊.

以胰腺假性囊肿为主要表现的胰腺癌一例

患者男,54岁.因上腹不适6月,皮肤巩膜黄染20 d入院.患者6月前因上腹不适在当地医院行B超与CT检查,提示胰管扩张,胰头钩突略增大,未行特殊处理.

前脑啡肽原及其甲基化与胰腺癌研究进展

自1975年Hughes等从脑中分离并鉴定出两个脑啡肽即甲啡肽和亮啡肽以后,陆续发现10多种来自不同基因的内源性阿片肽.前脑啡肽原(preproenkephalin, ppENK)作为重要的内源性阿片肽前体,其基因甲基化及降解产物甲硫氨酸-脑啡肽与胰腺癌的发生、发展及治疗关系密切,现综述如下.

胰腺星状细胞与胰腺癌的研究关系

胰腺癌的肿瘤病灶周围常有明显的纤维化,纤维化的本质是以胶原为主的细胞外基质(ECM)过多沉积,ECM的主要来源是活化的胰腺星状细胞(PSC),PSC与胰腺癌细胞之间的相互作用在胰腺癌的病理学变化中可能起重要作用.

胰腺星状细胞在慢性胰腺炎胰腺纤维化中的作用机制

CP是由于AP反复发作所造成的一种胰腺慢性进行性破坏的疾病.以反复发作上腹部疼痛伴不同程度的内、外分泌功能减退或丧失为特征.

胰腺星状细胞在胰腺腺癌进程中的作用及机制

胰腺癌主要为胰腺导管腺癌,其发病率与病死率接近, 5年存活率不到5%[1].病理检查显示,胰腺腺癌往往有显著增加的纤维组织增生,胰腺星状细胞(PSCs)是分泌细胞外基质的效应细胞,但在胰腺腺癌进程中可能起的作用尚未完全清楚,现将PSCs与胰腺癌的关系做一综述.

特发性急性胰腺炎病因学研究及诊治进展

AP是常见病、多发病,其主要病因为胆道疾病和暴饮暴食,约10% ～ 30%的患者找不到明确的病因,称为特发性急性胰腺炎(idiopathic acute pancreatitis, IAP).对IAP的治疗仅对症处理,不能去除病因,故易复发.只有确定了IAP的病因,才能合理治疗,降低复发率,提高患者的远期预后.

高脂血症性胰腺炎

自1952年Klaskin等[1]报告1例原发性高脂血症导致胰腺炎反复发作后,现已明确地认识到高脂血症是胰腺炎的病因之一.

重症急性胰腺炎并发症治疗体会——附52例分析

SAP是临床上较常见的急腹症,起病急骤,病情发展迅速,并发症多,病死率高.近年来随着诊疗技术的改进,尤其是随着生长抑素(如善宁)在临床上的广泛应用,病死率已有大幅度的下降,但迄今仍是临床上处理较为棘手的疾病之一.

2007年本刊一些常用词汇可直接用缩写

第六讲胰腺疾病的动物模型

胰腺疾病主要包括急性胰腺炎、慢性胰腺炎和胰腺癌,其动物模型的制作在研究疾病的发病机制、病因、治疗、转归等方面有重要意义.