致死剂量γ射线照射小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及与Bax和Bcl-XL表达的关系

目的观察致死剂量γ射线照射后小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及其与Bax和Bcl-XL表达的关系.方法清洁级C57小鼠225只,随机分为0、6、9、12、15和20 Gy 6个组,经γ射线全身一次照射,于照射前和照射后6 h～28 d活杀取材,用原位末端标记法(TUNEL)和Annexin-V流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞凋亡和坏死情况,用碱性磷酸酶免疫组化技术检测Bax和Bcl-XL蛋白的表达.结果①各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6 h出现一过性升高,以后迅速下降.6 Gy照射后7 d降至低,至照射后28 d基本恢复到正常水平.②不同剂量照射后6 h脾淋巴细胞凋亡率达高峰;照射后6～24 h,≤12 Gy 照射后凋亡率随照射剂量的增加而升高,≥15 Gy照射后凋亡率下降.③FCM检测结果证实,6～12 Gy照射后6 h,脾淋巴细胞凋亡率呈现出量-效关系,≥15 Gy照射后凋亡率下降,而坏死率明显升高.DNA凝胶电泳图谱分析支持上述结果.④照射后6 h, 6 Gy照射后脾淋巴细胞Bax蛋白表达增加,至12 Gy达峰值,显示出量-效关系;≥15 Gy未显示出量-效关系;Bcl-XL蛋白随照射剂量增加而持续降低,在6～12 Gy也显示出较好的量效关系.结论 6～12 Gy照射后脾淋巴细胞死亡方式以凋亡为主,≥15 Gy照射后凋亡与坏死均为淋巴细胞的重要死亡途径.促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-XL在致死剂量照射引起的淋巴细胞凋亡调控中起重要作用.

住院患者中急性肾功能衰竭的流行病学和病因学分析

目的探讨近年来住院患者中急性肾功能衰竭(ARF)流行病学、病因学变化以及导致这些变化的相关因素.方法收集北京大学第三医院1994年1月-2004年3月近10年出院病例中诊断有ARF患者的临床资料,分析其年龄、性别、获得性、发病科室以及病因或诱因等的变化情况.结果共搜集ARF病例211例,占同期住院患者的0.12%,逐年比较呈增高趋势;男性占59.7%,女性占40.3%;发病年龄呈现35～45岁和60～80岁两个高峰;84.4%(178/211例)患者既往无肾脏病史,39.8%(84/211例)为明确的医院获得性ARF(HA-ARF)患者,HA-ARF同期患者的构成比在2000年后显著增高(P<0.05),内、外科ARF患者比例约为3∶2,2000年后后者所占构成比显著增加(P<0.05),尤其外科重症监护治疗病房(SICU)患者发病率增加1.89倍.药物、感染和手术是ARF的主要诱因,61例(占28.9%)、46例(占21.8%)和41例(占19.4%)患者ARF的发病分别与之相关.肾前性ARF 41例(占19.4%);肾性ARF156例(占73.9%),其中72例(占46.2%)是由明确的肾前性ARF发展而来;急性肾小管间质病变占85.9%(134/156例);肾后性ARF 14例(占6.6%).结论近10年来,ARF在住院患者中所占构成比呈逐年增加趋势,HAARF发生率增加是其主要原因,药物、感染和手术是其主要病因.

血管紧张素转换酶基因多态性与肝肾综合征相关研究

目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性与失代偿性肝硬化并发肝肾综合征(HRS)之间的关系.方法应用聚合酶链反应方法扩增56例失代偿性肝硬化并发HRS患者及60例正常对照组ACE基因上DNA片断,根据I/D判断其多态性;同时各例均采血测丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)等指标,并测定肾小球滤过率(GFR),比较不同基因型间上述指标的差异显著性.结果 HRS患者各基因型及等位基因频率与对照组间差异均无显著性(P均>0.05);I等位基因频率均显著高于D等位基因频率(P均<0.01).正常对照组中3种基因型频率间差异无显著性(P>0.05);HRS组中II基因型频率显著高于ID型及DD型(P均<0.05).II基因型的BUN与SCr均显著高于ID型及DD型(P均<0.05),GFR显著低于ID型及DD型(P均<0.05).结论 ACE基因多态性与失代偿性肝硬化并发HRS的发生率有关,II基因型可能为失代偿性肝硬化易并发HRS的遗传学方面因素;失代偿性肝硬化并发HRS患者中,II基因型个体的肾功能衰竭程度重于ID型及DD型.

P物质和降钙素基因相关肽在胎兔皮肤无瘢痕愈合中的作用

目的探讨神经肽P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)在无瘢痕愈合中的作用.方法建立胎兔背部皮肤全层切割伤模型,采用免疫组化方法观察神经肽SP和CGRP在胎兔创伤愈合中的动态变化特点,并与正常胎兔、创伤成兔和正常成兔进行比较.结果胎兔皮肤愈合快,伤后3～5 d完全无瘢痕愈合;成兔伤后第7 d瘢痕愈合.胎兔皮肤伤后SP和CGRP阳性表达降低,以第2 d明显,分别为正常胎兔的75%和80%(P均<0.01),然后逐渐恢复正常;成兔皮肤伤后第1 d SP和CGRP表达明显降低,分别为正常成兔的60%和76%(P均<0.01),以后明显增加,第7 d达高峰,为正常成兔的168%和126%(P均<0.01),然后下降,第14 d与正常成兔基本相似.结论神经肽SP和CGRP的低表达在胎兔皮肤无瘢痕愈合中可能起重要作用.

高原与平原冲击波物理参数和生物效应的比较研究

目的比较高原冲击波与平原冲击波的物理参数和生物效应.方法实验猪25只,随机分为高原组15只和平原组10只,分别布放于距离爆心5.0 m和6.0 m处,用10 kg TNT爆炸致空气冲击伤,用压力传感器测定冲击波物理参数,观察伤后28 h动物存活情况和大体形态学改变.结果高原组与平原组相比,冲击波传播速度两组间差异未见显著性,高原组超压峰值总体趋势稍低于平原组,但正压持续时间和冲量总体趋势略高于平原组.伤后28 h高原组动物存活12只,平原组存活8只.病理形态学改变主要表现为不同程度的肺出血和肺水肿,部分动物有肠道浆膜下出血和心内膜下出血,高原组与平原组相比,肺损伤程度更重,可加重1个等级.结论高原环境下冲击波传播速度未见明显改变,超压峰值有所降低,持续时间和冲量有所增加,肺损伤程度更重.

人汗腺细胞的分离和纯化培养方法探讨

目的探讨建立人皮肤汗腺细胞体外分离及纯化培养的技术.方法通过酶消化法分离人皮肤汗腺,微量加样器在倒置显微镜屏视下吸取游离的汗腺组织移入Hank平衡盐溶液(HBSS),经纯化后予以原代培养.结果分离的汗腺可在体外贴壁生长、增殖并传代,纯化处理清除了杂质细胞和组织碎片,解决了成纤维细胞对汗腺细胞培养的污染难题,且汗腺的生长能力无明显改变.结论人汗腺细胞的培养存在着分离困难和成纤维细胞污染等难题,采用本方法可以获得大量处于良好生长状态的高纯度人汗腺细胞.

不同方法制备猪脱细胞真皮基质及创面移植的实验研究

目的比较两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植修复大鼠全层皮肤缺损的效果.方法使用DispaseⅡ/TritonX-100(中性蛋白酶/曲拉通)和高渗盐水/十二烷基硫酸钠(SDS)两种方法去除猪表皮及真皮中的细胞成分,分别得到猪脱细胞真皮基质Ⅰ和Ⅱ.63只SD大鼠背部全层皮肤缺损分别使用猪脱细胞真皮基质Ⅰ+自体刃厚皮及猪脱细胞真皮基质Ⅱ+自体刃厚皮覆盖,术后观察移植物成活率和植皮区收缩率,同时取移植物进行组织学观察,并与单纯自体刃厚皮移植相比较.结果两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植的移植物成活率和植皮区收缩率差异无显著性,组织学观察显示复合皮上皮化良好,胶原纤维排列有序,基底膜结构完整.两复合皮组术后第6周移植物成活率与自体刃厚皮组比较差异均无显著性,术后第4周开始两复合皮组移植物收缩率明显降低.结论两种方法制备的异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植都能很好地修复全层皮肤缺损,改善创面愈合质量.

成人骨髓间充质干细胞体外多向分化潜能特性的研究

目的研究体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化的能力.方法用细胞化学方法对诱导后的骨髓细胞进行脂肪细胞特异油红O染色;Von Kossa及改良的钙钴法进行成骨细胞鉴定;免疫组化方法检测诱导后的骨髓细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白-M(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果在不同的诱导条件下,诱导后的细胞油红O染色胞浆内可见橙红色脂滴;Von Kossa染色可见细胞间布满黑色颗粒,提示有矿化基质沉积;改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色.免疫组化染色显示向神经细胞方向诱导后细胞NSE(+)、NF-M(+)、GFAP(-).结论成人骨髓间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能.

瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中胸腺素β4基因表达变化及其意义

目的观察病理性瘢痕中胸腺素β4(TMSB4)mRNA的表达水平,探讨其表达水平与病理性瘢痕形成的关系.方法以组织块培养法于体外培养原代成纤维细胞.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,比较瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其培养的3组成纤维细胞中TMSB4 mRNA表达水平的变化.结果在上述3种组织中,TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩中的表达量显著少于在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达(P均<0.01),瘢痕疙瘩TMSB4 mRNA表达的平均值比增生性瘢痕减少66.98%,比正常皮肤减少62.48%.在上述3种组织培养的成纤维细胞中,TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著少于增生性瘢痕,平均减少27.13%(P<0.01);比在正常皮肤成纤维细胞中的表达平均减少16.07%,但差异无显著性.结论 TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩组织及其培养的成纤维细胞中的表达说明其与瘢痕疙瘩形成密切相关;TMSB4 mRNA在瘢痕疙瘩中表达减少可能是瘢痕疙瘩发病的重要致病因素之一.

人皮肤成纤维细胞的培养和鉴定

目的探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法.方法通过酶消化法分离人皮肤外分泌汗腺,在外分泌汗腺生长的同时,成纤维细胞也在生长;用质量分数为0.25%的胰酶和0.02%的乙二胺四乙酸(EDTA)消化分离汗腺细胞和成纤维细胞;以Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)为基础培养基,添加胎牛血清(体积分数10%)、青霉素(100 kU/L)和链霉素(100 mg/L),置37 ℃、体积分数为5%CO2、95%空气、饱和湿度条件下培养.倒置相差显微镜和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫组化及染色体鉴定.结果分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖,波形蛋白免疫组化染色为阳性,染色体分析为46条.结论该方法所获得的皮肤成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平上研究伤口愈合的机制提供了充足、可靠的靶细胞.

动脉原位扩张即时延长的实验研究

目的观察动脉快速延长对血管壁的影响,研究创伤性动脉缺损新的修复方法.方法选用12只杂种犬,对24条股动脉进行急性延长,分别于术后1、7 和28 d行延长段血管组织学、免疫组化和超微结构观察.结果各组血管腔通畅率为100%;延长段血管内膜光滑,中膜损伤轻微,各时间点胶原纤维与弹力纤维含量及其比值差异无显著性.动脉吻合后吻合口段顺应性降低;增殖细胞核抗原阳性细胞百分率峰值小于20%;吻合口和扩张段内、外径组间差异均无显著性.总体比较缺损组和手术对照组组织学改变差异无显著性.结论动脉缺损通过低压球囊扩张在有限张力存在下延长吻合是一种简单、安全、有效的治疗手段,可以部分替代静脉和人造血管移植,急诊情况下更具有实用价值.

脂肪组织提取液促进大鼠皮肤生长的实验研究

目的观察脂肪组织提取液对大鼠皮肤体外培养生长的影响.方法将2 mm×2 mm大小的新生大鼠皮肤接种到24孔培养板内,分别加入含有体积分数为10%脂肪组织提取液(提取液组)或体积分数为10%磷酸盐缓冲液(PBS组)的胎牛血清Dulbecco改良Eagle培养基培养6 d,测量皮肤培养后的面积.结果两组皮肤培养后均有生长,脂肪组织提取液组皮肤培养后面积为(8.43±1.40)mm2,而PBS组为(4.18±1.11)mm2,脂肪组织提取液组皮肤培养后面积约是PBS组的2倍,两组间差异有显著性(P<0.05).结论脂肪组织提取液对皮肤生长有促进作用,其机制可能是脂肪组织提取液内含有促细胞增殖的某些生长因子和其他有利于细胞生存的物质.

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血-再灌注损伤的保护作用及剂量-效应关系研究

目的评价改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对肠缺血-再灌注损伤后肠道保护作用的机制及剂量-效应关系.方法以夹闭大鼠肠系膜上动脉(SMA)制备肠缺血-再灌注损伤模型,并将动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、不同剂量(2、4和8 μg)改构型aFGF治疗组和4 μg野生型aFGF治疗组.除假手术组外,其余各组动物均于缺血45 min后再灌注2、6、12和24 h活杀,取血及小肠组织标本,检测血浆中D乳酸含量及组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特性,并检测肝、肾功能指标,观察不同剂量aFGF对肠缺血-再灌注损伤的影响.结果血浆D-乳酸变化及病理组织学观察显示,再灌注后12 h肠屏障功能及肝、肾组织损伤严重,而改构型aFGF 4 μg治疗组在伤后24 h损伤较生理盐水对照组和野生型aFGF治疗组有所减轻.PCNA的表达趋势与D-乳酸类似.结论改构型aFGF对肠缺血-再灌注损伤具有一定保护与促修复作用,其抗损伤修复作用呈剂量依赖性.

卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血白细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的观察拟胆碱药卡巴胆碱对肠缺血-再灌注大鼠外周血淋巴细胞和中性粒细胞凋亡及细胞因子mRNA表达的影响,探讨拟胆碱药的抗炎作用机制.方法 36只大鼠随机分为手术对照组、肠缺血1 h组、肠缺血1 h后再灌注1 h和2 h组、卡巴胆碱+肠缺血1 h组及卡巴胆碱+肠缺血1 h后再灌注2 h组.复制大鼠肠缺血-再灌注模型;肠缺血前10 min经肠袋给予卡巴胆碱.检测不同时间点大鼠外周血白细胞计数及分类、淋巴细胞和中性粒细胞凋亡率及白细胞中细胞因子mRNA表达水平.结果肠缺血1 h,大鼠外周血白细胞计数减少,淋巴细胞比例增加,中性粒细胞比例减少,再灌注后上述指标均呈反向变化;卡巴胆碱可抑制肠缺血引起的外周血淋巴细胞凋亡率的增加,但增加中性粒细胞的凋亡率.外周血白细胞中致炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗炎细胞因子白细胞介素-10(IL10)表达在肠缺血1 h时均增加,但再灌注后2 h,IL-10、IL4和γ干扰素(IFN-γ)表达则明显减少,与TNF-α表达明显增加的趋势相反;卡巴胆碱可改善这一变化.结论卡巴胆碱能减少肠缺血时淋巴细胞的凋亡,调节肠缺血再灌注时外周血白细胞中致炎和抗炎细胞因子表达失衡,在防治失控炎症反应、脓毒症和多器官功能障碍综合征中具有潜在临床应用价值.

不同液体复苏条件下多巴酚丁胺对肠缺血-再灌注休克的疗效比较

目的比较多巴酚丁胺在不同液体复苏条件下对兔肠缺血-再灌注损伤(I/R)所致休克的治疗效果.方法 32只新西兰白兔随机分为乳酸林格液(LRS)复苏组、LRS+羟乙基淀粉溶液(HES)复苏组、LRS复苏+多巴酚丁胺治疗组(LRS+DOB组)和LRS+HES复苏+多巴酚丁胺治疗组(LRS+HES+DOB组).采用肠系膜上动脉夹闭60 min后松夹行再灌注制备肠I/R休克模型,松夹再灌注时同步进行液体复苏和多巴酚丁胺治疗.观察各时间点血流动力学参数(平均动脉压、心率、心排血量、肠系膜上动脉血流)的变化,并通过测定动脉二氧化碳间隙[Pt-aCO2间隙=肠黏膜CO2分压(PtCO2)-动脉血CO2分压(PaCO2)]、肠黏膜pH值(pHi)、动脉血乳酸浓度和氧输送(DO2)等指标间接评价组织氧合情况.结果多巴酚丁胺能显著减轻兔肠I/R休克后平均动脉压、心率、心排血量和肠系膜上动脉血流的下降,两多巴酚丁胺治疗组与两复苏组比较,差异均有显著性(P均<0.05);且LRS+HES+DOB组平均动脉压下降程度较LRS+DOB组明显减轻(P<0.05).与LRS组比较,两多巴酚丁胺治疗组均能明显降低血乳酸浓度和PtaCO2间隙,升高pHi和DO2(P均<0.05),尤其在LRS+HES+DOB组效果更显著(P均<0.05),与LRS+DOB组比较,LRS+HES+DOB组在升高DO2方面差异无显著性(P>0.05).结论多巴酚丁胺既能提高兔肠I/R休克时的血流动力学参数,又能改善组织氧合功能,在LRS+HES复苏条件下使用效果更好.

创伤性大面积脑梗死的手术治疗效果分析

创伤性大面积脑梗死是继发于颅脑损伤后的严重并发症,被称为颅脑外伤中除原发性损伤和继发出血性脑损伤以外的"第三种打击力量".1993年5月-2004年5月,对我院32例经头颅CT、MRI证实外伤后并发大面积脑梗死患者行血肿清除及早期去大骨瓣减压手术治疗,取得了明显的疗效,报告如下.

中晚期下肢动脉栓塞的治疗体会

急性动脉栓塞是血管外科的常见急性病,其发病急、进展快,若不及时正确处理,常可造成足趾部分坏疽,甚至会危及生命.我科于1998年1月-2004年12月共收治急性动脉栓塞伴足趾坏疽患者42例,现将其诊治情况报告如下.

床旁介入血管栓塞治疗重度骨盆骨折合并失血性休克34例

回顾性分析2000年1月-2003年12月我院收治的骨盆骨折合并失血性休克患者51例,其中34例及早行床旁介入性血管栓塞治疗,效果满意,报告如下.

外科治疗严重多发伤274例临床分析

我院从1986年2月-2003年12月共收治多发伤患者480例,其中严重多发伤274例(占57.1%).现就其外科治疗效果总结分析如下.

肠缺血与小肠对肠内营养的耐受性

小肠对肠内营养的耐受性受肠内营养(EN)方案、小肠功能及致病因素的影响.EN时营养液成分、渗透压、输入时间、速度、温度和浓度及营养管置入方式等均影响小肠耐受性.小肠局部及全身各种致病因素如肠缺血、肠梗阻、肠道炎症及全身营养状况、血流动力学变化等也影响小肠耐受性.此外,各种外界致病因素通过干扰或损害小肠功能而影响小肠耐受性.外科常见的严重创伤、休克和大手术后EN患者均有不同程度肠缺血.肠道低灌注状态是引起肠道功能障碍和远隔器官损害的常见诱因,也是影响危重患者预后和生存的重要因素[1],其所致小肠功能改变是创伤外科及危重病医学领域中影响小肠耐受性的主要原因.现就这方面的研究进展综述如下.

欧洲评分预测心外科术后住院时间长短及并发症

内生性白细胞介素-12增强小鼠对大肠埃希菌的早期免疫反应

褪黑素对大鼠脓毒症时氧自由基引起的器官损伤具有保护作用

全骨盆离断濒死伤员1例救治体会

以腰椎(L5S1)离断并切除骨盆、盆腔内容物、双下肢和外生殖器为特点的全骨盆离断在临床上罕见,主要原因是很少有患者能被及时送到医院.我们成功地抢救了1例这样的患者并存活至今10个月,现结合文献讨论全骨盆离断濒死伤员的救治经验与体会.

过度增生性瘢痕相关基因的研究策略

瘢痕过度增生的机制并未完全阐明.回顾瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的临床表现、生物学特征及其他研究资料,人们不由地会想到,为什么有色人种瘢痕过度增生的发生率高于白色人种?为什么对于一般人不引起过度增生反应的微小损伤却能导致某些人产生瘢痕疙瘩?这些人是否存在有利于瘢痕发生的特殊基因条件?这些问题自然使人们关注到基因.

《2004严重感染和感染性休克治疗指南》系列讲座(8)儿科严重感染的治疗

严重感染和感染性休克是以全身性感染导致器官功能损害为特征的复杂临床综合征.近年来,抗感染和器官功能支持技术虽然取得了长足的进步,但严重感染发病率和病死率仍居高不下.面对严重感染和感染性休克的严峻形势,在拯救全身性感染运动(SSC,2002年10月由欧洲危重病医学会和国际感染论坛发起)的倡导下,来自11个国际组织的专家以循证医学为基础制订了<成人和儿科重症感染治疗指南>,旨在改善严重感染和感染性休克患者的预后.

多用抗血栓垫

发明人:张秀军 国家专利号:ZL 01 3 57908.8多用抗血栓垫(multi-fumctional anti-thrombosis cushion,MAC)的发明背景:长期以来,对于下肢深部静脉血栓形成、下肢深静脉瓣膜功能不全、下肢浅静脉炎的患者,住院治疗时患肢需抬高30°,在病房只得用几个枕头把患肢垫高,但垫的高低很不规范,且垫起的屈度也不一致.