缺氧时丝裂原激活蛋白激酶类对人肾小管上皮细胞富含半胱氨酸蛋白61基因转录活性的调控

目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶类(MAPKs)对缺氧条件下人近端肾小管上皮细胞(HKC)中富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)基因转录活性的调控机制.方法 缺氧培养HKC,Northern印迹检测Cyr61 mRNA表达;Western印迹检测Cyr61、p38、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun-N末端蛋白激酶(JNK)以及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.构建含有人Cyr61基因启动子的报告基因Cyr61-luc质粒,将其单独或者分别与表达活性MAPKs的质粒Ca-MEK1和Ca-MKK6共同瞬时转染HKC.通过荧光素酶活性检测观察缺氧、MAPKs抑制剂和MAPKs活性酶对Cyr61基因转录活性的调控.结果 缺氧时HKC表达Cyr61、HIF-1α增高,ERK1/2、JNK、p38总量不变,而其各自的磷酸化形式均明显增加.HKC转染Cyr-luc后,p38通路抑制剂SB203580和ERK通路抑制剂PD98059显著抑制缺氧时Cyr61的转录活性,两者协同作用时抑制作用显著增强.Ca-MEK1与Cyr-luc共转染HKC后,Cyr61转录活性无改变;而Ca-MKK6与Cyr-luc共转染后,Cyr61转录活性显著增高.对缺氧培养的HKC,PD98059处理使HIF-1α和Cyr61蛋白表达显著降低;SB203580处理可显著降低Cyr61蛋白表达,但对HIF-1α无影响.结论 在HKC中,缺氧可通过p38通路直接上调Cyr61基因启动子活性,也可通过ERK1/2途径促进HIF-1α表达,间接调节Cyr61基因启动子活性.

表没食子儿茶素没食子酸酯对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶活性的影响

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响.方法 采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,实验分3组:正常对照组、糖尿病模型组和EGCG干预组.EGCG干预组于模型成功后1周给予EGCG 5 mg·kg-1·d-1腹腔注射.以免疫组织化学方法检测肾组织磷酸化ERK(p-ERK)的表达.大鼠肾系膜细胞株分组:正常对照组(NG,葡萄糖5 mmol/L),高糖组(HG,葡萄糖30mmol/L),HG+EGCG1组(100 μg//L),HG+EGCG2组(200 μg/L),HC+EGCG4组(400 μg/L),甘露醇组(5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇).用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞增殖活性;常规生化分析系膜细胞氧化应激状态;Western印迹检测ERK、p-ERK和p27蛋白表达水平.结果 EGCG呈剂量和时间依赖方式抑制高糖时系膜细胞的增殖活性及抗氧化作用.EGCG干预后糖尿病大鼠肾脏p-ERK蛋白免疫组化染色明显减弱.高糖时系膜细胞p-ERK及p27蛋白表达上调,EGCG呈剂量和时间依赖方式下调高糖时p-ERK蛋白的表达;呈剂量依赖方式下调p27蛋白的表达.结论 EGCG能有效改善糖尿病肾损伤程度,其作用机制可能是通过调节ERK活性,抑制p27蛋白表达而减少糖尿病肾病损害.

替米沙坦对老年糖尿病大鼠足细胞黏附的保护作用

目的 探讨替米沙坦对足细胞黏附的保护作用.方法 用20月龄SD大鼠制备糖尿病模型,随机分为糖尿病组和替米沙坦治疗组,另设老年和6周龄对照组.于实验第4、8、12周末收集大鼠24 h尿,监测血压.12周后行组织病理学检查,检测尿白蛋白(24 h)和血、尿肌酐.以间接免疫荧光-hoechst 33342双染检测尿中足细胞数量.RT-PCR、免疫组化和Western印迹等方法检测肾小球中整合素α3、整合素连接激酶(ILK)mRNA和蛋白表达.结果 随实验进程,老年糖尿病大鼠尿白蛋白、血压和尿中足细胞数量明显高于对照组(P＜0.05),且出现较为明显的病理学损害.肾小球整合素α3 mRNA及蛋白表达量减少,ILK表达明显增加(P＜0.05).第12周,整合素α3蛋白表达与ILK表达呈负相关(P＜0.05).尿足细胞数量、尿白蛋白程度与ILK表达呈正相关(P＜0.05).替米沙坦明显减轻肾脏病理损害,增加整合素α3表达,降低ILK表达,减少尿足细胞数量.结论 老年糖尿病大鼠足细胞的黏附能力下降,尿足细胞排泄增加.替米沙坦可增强足细胞黏附,对足细胞存活起重要作用.

洛沙坦对糖尿病大鼠肾脏炎症反应及足细胞损伤的影响

目的 探讨洛沙坦对糖尿病大鼠模型肾组织炎症反应及足细胞损伤的影响.方法 Wistar大鼠随机分为3组:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、洛沙坦治疗组(DL).链脲菌素(STZ)注射建立糖尿病动物模型,洛沙坦治疗组在大鼠建立糖尿病同时即开始以洛沙坦(20mg·kg-1·d-1)灌胃治疗.分别于2周和12周杀鼠,观察体重、肾重、肾重/体重指数、尿蛋白量(24 h)、Scr、Ccr以及肾组织病理改变;免疫组化染色观察肾小球细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞共同抗原(CD45)、nephrin、血管内皮生长因子(VEGF)表达的改变;免疫印迹观察肾组织nephrin、VEGF表达的改变.结果 (1)DL组大鼠肾重/体重指数、尿蛋白量(24 h)、Ccr则均低于DM组,差异均有统计学意义(P均＜0.05),其病理改变程度也比DM组轻.(2)免疫组化及免疫印迹显示,DM组和DL组肾小球ICAM-1、CD45、VEGF表达均高于对照组,而DL组ICAM-1、CD45、VEGF表达均低于DM组;DM组和DL组大鼠肾小球nephrin表达低于对照组;DL组肾小球nephrin表达高于DM组,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 洛沙坦可能通过抑制肾组织白细胞浸润、炎症反应及减轻足细胞损伤,达到肾脏保护作用.

转化生长因子β1对脂多糖刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响,并探讨其可能的机制.方法 把原代培养的第2代大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)分成对照组、LPS刺激组(1 mg/L)、TGF-β1刺激组(5 μg/L)及LPS+TGF-β1刺激组.RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)mRNA及蛋白的表达.蛋白印迹方法检测磷酸化核因子(p-NF)-κB/NF-κB值的变化.结果 (1)LPS可刺激RPMCs上调TNF-α和IL-6表达.LPS刺激24 h后,p-NF-κB/NF-κB值升高.(2)TGF-β1可拮抗LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞上调TNF-α和IL-6表达,同时,也降低p-NF-κB/NF-κB值.结论 在体外培养的大鼠腹膜间皮细胞,TGF-β1可拮抗LPS的致炎作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化而介导.

冠状动脉钙化对维持性血液透析患者心脏结构和功能的影响及其相关因素评估

目的 观察冠状动脉钙化(CAC)对维持性血液透析(MHD)患者心脏结构和功能的影响,探讨引起CAC的相关危险因素.方法 40例MHD患者经螺旋CT扫描,了解合并CAC的患者比例,并计算其钙化积分以评估CAC程度.应用心脏彩超和颈动脉超声检查心脏形态、功能及颈动脉斑块,进一步分析MHD患者各项临床指标与CAC的关系.结果 25例MHD患者(62.5%)合并不同程度的CAC,平均钙化积分为672.3.钙化组(CAC组)与无钙化组(NCAC组)心脏形态及左室顺应性、颈动脉内膜中层厚度(IMT)、斑块发生率、斑块积分差异均有统计学意义.缺血性心脏病和心衰竭发生率均以CAC组为高.4例死于心脏疾病患者均存在CAC.颈动脉斑块阳性组IMT平均为(0.86+0.15)mm,钙化发生率为81%,冠状动脉钙化积分为867±198,均明显高于斑块阴性组[分别为(0.73±0.14)mm,42%,437+176,P＜0.05].CAC组年龄、糖尿病或肥胖患者比例、透析时间、血磷、C反应蛋白(CRP)、胆固醇和低密度脂蛋白水平、钙磷乘积、颈动脉IMT、斑块积分均高于NCAC组.多元逐步回归分析显示,年龄、透析时间与CAC密切相关.结论 MHD患者普遍存在CAC.CAC与心脏结构、功能的变化及颈动脉粥样硬化相关.糖尿病及肥胖患者比例、钙磷代谢及脂代谢异常、透析时间、CRP、动脉粥样硬化是CAC的相关因素.年龄和透析时间是CAC的独立危险因素.

慢性肾脏病非透析患者脑钠素与动脉粥样硬化及心功能的关系

目的 研究脑钠素(BNP)与慢性肾脏病(CKD)非透析患者动脉粥样硬化及心功能不全的关系.方法 采用双抗夹心免疫荧光法检测203例CKD非透析患者与16例高血压患者对照组全血BNP水平,分析其与颈动脉超声结果、心脏彩超结果及既往心血管疾病史的关系.结果 CKD非透析患者BNP水平与对照组相比显著升高[M(范围):54.40(15.10～173.00)ng/L比9.35(7.35～15.00)ng/L,P＜0.01].Spearman相关分析显示CKD患者BNP与颈动脉内膜中层厚度(IMT)、左室心肌重量指数(LVMI)等呈正相关.存在颈动脉斑块、左室肥厚或既往发生过心血管事件的患者血BNP水平显著增高.多元回归分析显示LVMI、既往心血管事件均是影响BNP水平的独立因素.结论 CKD非透析患者BNP水平和动脉粥样硬化性疾病、左室肥厚及心功能不全相关,提示BNP水平可作为一项评价CKD非透析患者心功能及动脉粥样硬化的敏感生物学指标.

卡维地洛治疗肾病患者难治性高血压的前瞻性多中心临床研究

目的 评价卡维地洛治疗各种肾脏病患者中难治性高血压的安全性、降压疗效和其对心肾功能的影响.方法 采用前瞻性、多中心、开放、自身对照试验,入选患者共217例,观察期限为8周.结果 与用药前相比,所有患者治疗4周后平均收缩压(SBP)和舒张压(DBP)均明显下降(P＜0.01).卡维地洛治疗4周降压有效率达57.1%,显效率为11.5%;至用药8周时有效率达79.7%,显效率为26.7%.治疗后平均心率有所下降,由治疗前(79.3±10.2)次/min下降为4周时(75.9±7.6)次/min和8周时的(75.0±8.5)次/min(P＜0.05),但仍处于正常范围.血浆中去甲肾上腺素平均水平由治疗前38.7 ng/L降至17.6 ng/L(P＜0.05).卡维地洛治疗后患者肝肾功能、心电图均无明显改变,不良反应轻微.结论 卡维地洛治疗肾病患者难治性高血压安全有效.

浙江省某乡村慢性肾脏病的流行病学研究

目的 研究我国南方某农村人群中慢性肾脏病(CKD)的患病率及相关因素.方法 对浙江省东阳市某乡村18岁以上的常住居民慢性肾脏病情况及相关因素进行调查和检测.结果 获得完整资料的居民占该村18岁以上自然人口的76.2%.将该村自然人口按年龄性别构成校正后,白蛋白尿发生率为10.4%;肾小球滤过率＜60 ml·min-1·(1.73 m2)-1的发生率为3.0%;血尿发生率为1.4%.本研究中40岁以上调查对象与北京市某社区及NHANES Ⅲ中40岁以上调查对象相比,高血压及糖尿病的患病率较低,白蛋白尿和肾功能下降的发生率介于2者之间.多因素Logistic回归提示,年龄增加10岁、糖代谢异常及收缩压水平与白蛋白尿的发生独立相关;女性、年龄增加10岁、高尿酸血症与肾功能下降独立相关;年龄增加10岁及吸烟与血尿独立相关.结论 在该经济快速发展的南方乡村,CKD的疾病谱和相关因素已经与我国大城市和发达国家类似.此外,该人群可能另有导致CKD高发的特殊原因,需进一步研究.

广州市城区普通人群中慢性肾脏病的流行病学研究

目的 探讨我国南方城市人群中慢性肾脏病(CKD)的患病情况及相关危险因素.方法 在广州市城区采用分层多级随机抽样的方法,抽取天河区和海珠区20岁以上的常住居民2213人,进行慢性肾脏病及相关危险因素的检测和问卷调查.结果 在资料完整的2128名居民中,经过人口年龄、性别构成比校正后,白蛋白尿的患病率为6.2%(95%CI为5.9%～6.4%);血尿的患病率为6.5%(95%CI为5.3%～7.8%);肾功能下降的患病率为1.6%(95%CI为1.3%～2.0%).该人群CKD的患病率为10.1%;知晓率为9.7%.结论 在我国南方的大城市中,人群CKD的患病率为10.1%,知晓率为9.7%.CKD的相关危险因素包括年龄、高血压及糖尿病.

金雀异黄素对血小板源生长因子刺激下大鼠系膜细胞周期调节蛋白的影响

金雀异黄素(genistein)可影响多种细胞尤其肿瘤细胞的细胞周期调节蛋白的表达而调控细胞的增殖与凋亡,并通过调节细胞外基质(ECM)降解系统酶的活性影响基质的积聚.我们的前期实验已证实血小板源生长因子(PDGF-BB)可诱导体外培养的大鼠系膜细胞(MC)增殖,金雀异黄素可呈浓度依赖性抑制其增殖[1].既然细胞增殖的调控是在细胞周期水平上进行,而细胞周期又由细胞周期调节蛋白来调控,本实验我们拟研究金雀异黄素如何影响细胞周期调节蛋白的表达终达到抑制细胞增殖的效应,为金雀异黄素在肾病中的应用提供实验依据.

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病(DN)晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比,抑制凋亡则可延缓肾小球硬化.褪黑素(MT)是松果体分泌的神经内分泌激素,肾脏是其靶器官之一.研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用[1],但MT对DN晚期肾小球系膜细胞(MC)凋亡的影响尚未检索到有关报道.本试验选用大鼠MC为研究对象,来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响.

肾血管性高血压的介入治疗

我们评价经皮肾动脉腔内成形术(PTRA)及内支架植入术治疗肾血管性高血压(RVH)的疗效.

腹膜透析导管移位手法复位成功一例

腹膜透析导管移位是腹膜透析的并发症之一,作者采用手法复位成功1例,现报告如下.

肾病综合征患者腺苷脱氨酶活性的变化及意义

通过检测对激素不同反应、不同病情的肾病综合征(NS)患者的血清及淋巴细胞内腺苷脱氨酶(ADA)的活性变化,观察ADA活性与临床疗效的关系.

来氟米特及雷公藤多甙联合泼尼松治疗难治性肾病综合征

难治性肾病综合征治疗方案的研究是肾脏疾病临床工作的重要内容.我院采用来氟米特及雷公藤多甙联合泼尼松治疗难治性肾病综合征,取得良好的效果,现报道如下.

外周切割球囊治疗血液透析患者内瘘狭窄四例

血透患者内瘘狭窄是临床上较难处理的一个问题,而应用外周切割球囊(PCB)治疗内瘘狭窄经检索目前国内尚无报道.我院自2006年4月至9月,应用外周切割球囊对部分血透患者内瘘狭窄段进行扩张治疗,取得了良好的近期疗效和初步的临床经验,现报告如下.

异体骨髓移植术后并发慢性移植物抗宿主病相关的膜性肾病一例

我们遇到1例慢性移植物抗宿主病(cGVHD)相关的膜性肾病,报道如下.患者,男,15岁,1997年在本院诊断为急性淋巴细胞性白血病,于2004年4月在本院行异体骨髓移植术.术后给予甲泼尼龙(美卓乐)64 mg/d及环孢素A 5.6 mg·kg-1·-1口服,并逐渐减量.8个月后出现颜面及双下肢水肿、皮肤色斑、视物不清及尿蛋白3+,诊断为cGVHD.改用美卓乐(20 mg/d)+霉酚酸酯(骁悉)(2 g/d)+FK506(2.5 mg/d)+甲氨蝶呤(10 mg·kg-1·周-1)治疗后尿蛋白转阴.遂停美卓乐、甲氨蝶呤及FK506,以骁悉1 g/d及泼尼松10 mg/d长期维持.2006年4月患者症状复发,尿蛋白3+,泼尼松加至30 mg/d,症状仍无改善,遂收入本院肾内科.

血液透析应用低分子肝素诱发Ⅱ型血小板减少症一例

血液透析常用的抗凝剂低分子肝素诱发的Ⅱ型血小板减少症(HIT)较为罕见,现报告1例.

血管新生的调控在慢性肾脏病进展中的作用和意义

器官和组织的血管系统形成包括两种形式,一种称为血管新生(angiogenesis),指在原先存在的毛细血管和(或)微静脉的基础上以芽生或非芽生的方式生成新的成熟血管;另一种称为血管生成(vasculogenesis),主要发生在胚胎早期,血管直接由成血管细胞长成,是血管从无到有的过程[1].目前文献所指的血管生成实际上主要指血管新生,血管新生与创伤修复、缺血缺氧、肿瘤、炎症、自身免疫和内分泌等疾病的过程密切相关.肾脏存在丰富的毛细血管网结构,近年来研究证实多种急、慢性肾损害均伴有微血管系统丧失或过度新生,并由此提出了调控血管新生改善肾病进展的治疗概念.因此,我们就血管新生及其调控在慢性肾脏疾病的进展情况作一综述.

循证医学在我国肾脏病学科发展中的应用现状与展望

进入21世纪以来,我国肾脏病学界对循证医学的认识及重视程度均有了很大提高,应用循证医学的知识和手段提高我国肾脏病专业的学科水平也已取得很大的成绩.

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如何开展临床研究及需要注意的问题

临床科室在各类临床研究中扮演的是研究者的角色,而临床研究中常见的是新药的临床研究.按照国家食品药品监督管理局(SFDA)规定,注册不同类别的新药,要完成不同要求的临床试验.本文主要述及药物临床研究,其它类型研究也具有共同点.

应用循证医学的理念推动肾脏疾病研究发展

在我国肾脏疾病的领域,循证医学(evidence based medicine,EBM)已受到人们越来越多的关注,而这方面的研究成果也不断涌现.现在,循证医学已经成为一个非常时髦的名词,但并不是所有被冠以"循证"的研究都可以指导我们的临床和科研工作.我们应该运用循证医学实事求是的理念来推动肾脏疾病研究的发展.